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柱式 DNA 膠回收試劑盒50 次實驗

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更新時間:2017-07-14 13:16:23瀏覽次數:142次

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柱式 DNA 膠回收試劑盒50 次實驗使用方法 一、準備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產品的使用手冊)。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

柱式 DNA 膠回收試劑盒50 次實驗產品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發了本產品。它具有下列特點: 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 RNA 進行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
柱式 DNA 膠回收試劑盒50 次實驗詳細介紹:

柱式 DNA 膠回收試劑盒50 次實驗使用方法:
一、準備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應效率)。但如果實驗條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/BisTEMED 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
柱式 DNA 膠回收試劑盒50 次實驗后續處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉移到帶正電的尼龍膜上,然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經過同位素標記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向對置進行放射自顯影。
小鼠胚胎成纖維細胞(來自NIH3T3);PA12

GGT1 Others Rat 大鼠 GGT1 人細胞裂解液 (陽性對照)

人結腸平滑肌細胞*培養基 100mL

M1細胞,小鼠白血病細胞 脆弱擬桿菌 新生牛眼Tenon's囊成纖維細胞;NBTF

CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a)

P388D1(小鼠淋巴樣瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 野豬 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人細胞裂解液 (陽性對照)
APCS Others Human Serum amyloid P component / APCS / SAP 人細胞裂解液 (陽性對照)

人卵巢腺癌細胞;SK-OV-3

兔脂肪間質干細胞 Rabbit adipose derived mesenchymal stem cells

BE(2)-M17細胞,人神經母細胞瘤細胞 寄生曲霉 293來源病毒包裝細胞;ΦA

SUP-B15(Ph+急淋白血病細胞系) 5×106cells/瓶×2

Hepa 1-6(小鼠肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0458U-118 MG(人腦星形膠質母細胞瘤)5×106cells/瓶×2 人胎兒胸腺細胞株;HFT-8810 [HFT8810]
人卵巢腺癌細胞;SK-OV-3

APCS Others Human Serum amyloid P component / APCS / SAP 人細胞裂解液 (陽性對照)

兔脂肪間質干細胞 Rabbit adipose derived mesenchymal stem cells

BE(2)-M17細胞,人神經母細胞瘤細胞 寄生曲霉 293來源病毒包裝細胞;ΦA

SUP-B15(Ph+急淋白血病細胞系) 5×106cells/瓶×2

Hepa 1-6(小鼠肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0458U-118 MG(人腦星形膠質母細胞瘤)5×106cells/瓶×2 人胎兒胸腺細胞株;HFT-8810 [HFT8810]
Anti-NOS-2/iNOS /FITC 熒光素標記一氧化氮合成酶-2抗體(誘導型)IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

Anti-ZNF217/FITC 熒光素標記鋅指脂蛋白217抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

細胞凋亡敏感性基因 Anti- 0.1ml

Goat Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

Frizzled 4 英文名稱: CD344抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh POMC 阿黑皮素原抗體 規格 0.1ml

Anti-ZNF217/FITC 熒光素標記鋅指脂蛋白217抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Gold 膠體金標記的羊抗豚鼠IgG 0.5ml

FSD1 英文名稱: FSD1蛋白抗體 0.2ml

鈣調節蛋白-1抗體 Anti-Calponin 1 0.2ml

Anti-Nogo R/NGR /FITC 熒光素標記軸索過度生長抑制因子受體/Nogo受體抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Porimin 前細胞脹亡受體誘導膜損傷蛋白抗體 規格 0.2ml

Anti-ZCWCC1/FITC 熒光素標記ZCWCC1抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
柱式 DNA 膠回收試劑盒50 次實驗Rabbit MMP-9 兔血清金屬基質蛋白酶-9Multi-class antibodies規格: 48T

Anti-FOS B FosB蛋白抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rabbit IgG/Cy7 Cy7標記的小鼠抗兔IgG 規格 0.1ml

VLA4(Human very late appearing antigen 4) ELISA Kit 人遲現抗原4 96T

SLC4A4 variant A 英文名稱: *協同轉運蛋白4-A4突變型抗體 0.1ml

CDAN1 英文名稱: 先天性紅細胞生成異常性貧血蛋白1抗體 0.2ml

Anti-FOS B FosB蛋白抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml

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