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miRNA PAGE 膠回收試劑盒40 次運輸

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更新時間:2017-07-14 13:23:10瀏覽次數:162次

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miRNA PAGE 膠回收試劑盒40 次運輸使用方法 一、準備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產品的使用手冊)。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

miRNA PAGE 膠回收試劑盒40 次運輸后續處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉移到帶正電的尼龍膜上,然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經過同位素標記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向對置進行放射自顯影。

miRNA PAGE 膠回收試劑盒40 次運輸詳細介紹:

miRNA PAGE 膠回收試劑盒40 次運輸產品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發了本產品。它具有下列特點: 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 RNA 進行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
miRNA PAGE 膠回收試劑盒40 次運輸使用方法:
一、準備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應效率)。但如果實驗條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/BisTEMED 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
豬腎傳代細胞;IBRS-2

GBP1 Others Human GBP1 人細胞裂解液 (陽性對照)

木瓜蛋白酶(10mL酶解緩沖液) 1mL

PC9-EGFP-puro(慢病毒構建穩定株)人肺癌細胞 PC9-EGFP-puro (lentiviral construct stable strain) in human lung cancer cells DMEM+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin

IL32 Protein Human 重組人 Interleukin-32 / IL-32 蛋白 (isoform alpha, His 標簽)

人結腸平滑肌細胞(HCSMC)(5×105 ) RLF, 大鼠淋巴成纖維細胞 Rattus
CD93 Others Human CD93 / C1QR1 人細胞裂解液 (陽性對照)

人慢性髓系白血病細胞;K562

MS751 人子宮頸表皮癌細胞

NCI-H661人大細胞肺癌細胞 NCI-H661 large cell lung cancer cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

AIMP1 Protein Human 重組人 AIMP1 / EMAP2 / SCYE1 蛋白 (His 標簽)

人胚肺二倍體細胞;2BS 人前列腺成纖維細胞*培養基 100mL
人慢性髓系白血病細胞;K562

CSF1R Others Mouse 小鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人細胞裂解液 (陽性對照)

C57BL/6小鼠脂肪間質干細胞 C57BL/6 mouse adipose mesenchymal stem cells

BE(2)C細胞,人神經母細胞瘤細胞 乙型溶血性鏈球菌 人胚肝二倍體細胞;CCC-HEL-1

Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

HEp-2(人喉表皮樣癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0450SW 982(人滑膜肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2 人上皮細胞;MCF-10A
Cys-C ELISA Kit 大鼠半*蛋白酶抑制劑/胱抑素CMulti-class antibodies規格: 48T

Anti-YY1 核轉錄因子YY1抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh G protein alpha Inhibitor 2 G蛋白α抑制蛋白2抗體 規格 0.2ml

IL-5(Mouse Interleukin 5) ELISA Kit 小鼠白介素5 96T

Nephrin 英文名稱: 腎小球細胞粘附分子受體抗體 0.1ml

APRT 英文名稱: 腺嘌呤磷酸核糖轉移酶抗體 0.2ml

Anti-YY1 核轉錄因子YY1抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Goat Anti-Chicken IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的羊抗雞IgG 0.1ml

FUT7 英文名稱: 巖藻糖基轉移酶7抗體 0.2ml

溴脫氧尿苷抗體 Anti-BrdU 0.1ml

Anti-SIGLEC11/FITC 熒光素標記唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素11抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PPAP2C 磷酸脂磷酸水解酶2抗體 規格 0.1ml

Anti-CD94/KLRD1/FITC 熒光素標記NK細胞表面抑制性受體CD94抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
miRNA PAGE 膠回收試劑盒40 次運輸MIP-1 Gamma 大鼠巨噬細胞炎性蛋白-1γMulti-class antibodies規格: 48T

Anti-E2F3 轉錄因子E2F-3抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh NALP6 富含*重復結構域蛋白6抗體 規格 0.2ml

Human thrombomodulin,TM ELISA Kit 人血栓調節蛋白 96T

SLC25A10 英文名稱: 線粒體二羧酸載體蛋白抗體 0.2ml

c-phycocyanin 英文名稱: C-藻藍素/藻藍蛋白/藻青蛋白抗體 0.2ml

Anti-E2F3 轉錄因子E2F-3抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml

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