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PCR 法 DNA 探針標記試劑盒5次特點

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更新時間:2017-07-14 13:39:17瀏覽次數:154次

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PCR 法 DNA 探針標記試劑盒5次特點一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。

PCR DNA 探針標記試劑盒5次特點詳細說明書:

PCR DNA 探針標記試劑盒5次特點使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液.
3. 37
反應 30 分鐘。
4. 70加熱 510 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 7 M CH3COONH4pH 4.5)。如使用 CH3COONa 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM
6. 加入 87.5 μL2.5 倍)的冷無水乙醇,-20放置 3060 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 58 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時,請在第 8 步之后進行。
PCR DNA 探針標記試劑盒5次特點確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 5-12,一般情況下可以在 55進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預雜交步驟 預雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉,否則這些位點會吸附標記的探 針,造成高背景。
1. 將結合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應在不停 的搖動狀態中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
PCR DNA 探針標記試劑盒5次特點步驟:
1. 如果標記的探針是雙鏈核酸,則需經變性處理。具體操作是:根據探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機封口)。探針的加入量視探針標記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發生遺漏、污染工作環境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠胰*α2A(AMY2A)ELISA試劑盒 ,英文名: AMY2A ELISA Kit

人抗浦肯野細胞抗體/Yo抗體(PCA-1/Yo)ELISA檢測試劑盒Humanpurkinjecellautoantibody,PCA-1/YoELISAKit 96T/48T

大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)免疫試劑盒 Rat β-site APP-Cleaving Enzyme 1,BACE1 ELISA Kit

CLIAKitforT.gondii(HumanToxoplasmaGondiiELISAKit人剛地弓形蟲規格:48T/96T

人體Stat1基因甲基化檢測試劑盒20

ELISAKitMSA人抗紡錘體抗體規格:48T/96T
小鼠Misato同源物1(MSTO1)ELISA試劑盒 ,英文名: MSTO1 ELISA Kit

人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-)ELISA檢測試劑盒Humanplaetmembraneglycoprotein,GP-ELISAKit 96T/48T

大鼠固醇調節元件結合蛋白1A(SREBP-1A)免疫試劑盒 Rat sterol regulatory element-binding protein 1A,SREBP-1A ELISA Kit

CLIAKitfor大鼠Smad7ELISAKit大鼠Smad7規格:48T/96T

磷脂酰肌醇PI(phosphatidylinositol)高效液相色譜法定量檢測試劑盒20

ELISAKitIgM*M規格:48T/96T
小鼠活化素A(Activin-A)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human neuron specific enolase (NSE) ELISA Kit 人神經特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒

humanBeta-Endorphin,β-EPELISAKit 人β內啡肽(β-EP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humananti-Mi2-antibodyELISA試劑盒人抗Mi2抗體(anti-Mi2-Ab)ELISA試劑盒規格:96T/48T

植物培養細胞DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒20

HumanUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAKit人*型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒規格:96T/48T
Lyso-PAF C-16-d4 100 ug     1-O-hexadecyl-7788-d4-sn-glyceryl-3-phosphorylcholine Lyso-Plaet-activating Factor C-16-d4 Lyso-PAF C-16-d4

UNC3230 1 mg     5-[cyclohexylcarbonylamino]-2-pxenylamino-4-thiazolecarboxamide

RPE-標記鏈霉親和素偶聯物 1 mg/ml     RPE-streptavidin conjugate 1 mg/ml

CAY10679 10 mg     11-18-dioxo-18-octanediylbis[glycyl-glycine NN-bisglycyl-glycine-hexane-16-Dicarboxyamide CAY10679

Linoleic Acid 1 g     9Z12Z-octadecadienoic acid fairic Acid Linoleic Acid

2-44-metxylpxenyl-12-benzisothiazol-32H-one     Jumonji HDM Inhibitor PBIT
Gliadin (43-49)(Gliadorphin) AlphaTyr-Pro-Gln-Pro-Gln-Pro-Phe

W-K-Y-M-V-M-NH2Trp-Lys-Tyr-Met-Val-Met-NH2

[Leu144, Arg147]-PLP (139-151), [L144, R147-PLP(139-151)]His-Ser-Leu-Gly-Lys-Leu-Leu-Gly-Arg-Pro-Asp-Lys-Phe

Biotin-[Gln1]-Gastrin I (human)Biotin-Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2

Obestatin, rat, mousePhe-Asn-Ala-Pro-Phe-Asp-Val-Gly-Ile-Lys-Leu-Ser-Gly-Ala-Gln-Tyr-Gln-Gln-His-Gly-Arg-Ala-Leu-NH2
PCR DNA 探針標記試劑盒5次特點二正丙胺DipropylamineCP250mL

CA1371-5g牛血清白蛋白(全組分)9048-46-85g0

ER0711Van91 I400 units

Plasmid Maxi Kit10T

Inositol100g

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