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4× 核酸液相雜交液10mL說明書

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更新時間:2017-07-17 12:48:49瀏覽次數:307次

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4× 核酸液相雜交液10mL說明書一般使用0.1×SSC做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。

4× 核酸液相雜交液10mL說明書詳細說明書:

4× 核酸液相雜交液10mL說明書使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液.
3. 37
反應 30 分鐘。
4. 70加熱 510 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 7 M CH3COONH4pH 4.5)。如使用 CH3COONa 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM
6. 加入 87.5 μL2.5 倍)的冷無水乙醇,-20放置 3060 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 58 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時,請在第 8 步之后進行。
4× 核酸液相雜交液10mL說明書確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 5-12,一般情況下可以在 55進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預雜交步驟 預雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉,否則這些位點會吸附標記的探 針,造成高背景。
1. 將結合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應在不停 的搖動狀態中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
4× 核酸液相雜交液10mL說明書步驟:
1. 如果標記的探針是雙鏈核酸,則需經變性處理。具體操作是:根據探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機封口)。探針的加入量視探針標記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發生遺漏、污染工作環境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒 ,英文名: FT4 ELISA Kit

人中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)ELISA檢測試劑盒Humanneutrophilelastase,NEELISAKit 96T/48T

大鼠白介素1β(IL-1β)免疫試劑盒 Rat Interleukin 1β,IL-1β ELISA Kit

CLIAKitforTCCC5b-9(MouseterminalcomplementcomplexC5b-9)ELISAKit小鼠末端補體復合物C5b-9規格:48T/96T

人體HLA-DPB1RFLP基因分析試劑盒20

ELISAKitTTN人抗肌聯蛋白抗體規格:48T/96T
大鼠主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHC/AgB/H-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人血管舒緩激肽(BK)免疫試劑盒 Human Bradykinin,BK ELISA Kit

人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)ELISA試劑盒 ,英文名: LSP ELISA Kit

RatInterleukin16,IL-16ELISA試劑盒大鼠白介素16(IL-16)ELISA試劑盒規格:96T/48T

Humanglucokinaseregulatoryprotein,GKRPELISA試劑盒人葡萄糖激酶調節蛋白(GKRP)ELISA試劑盒規格:96T/48T

HumanInterleukin5IL-5ELISAKit人白介素-5(IL-5)ELISA試劑盒規格:96T/48T
小鼠鈣結合蛋白(CR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat endocrine gland vascular endothelial growth factor (EG-VEGF) ELISA Kit 大鼠內分泌腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒

Humanthrombospondin1,TSP-1ELISAKit 人血小板反應蛋白/*敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanApolipoproteinE,Apo-EELISA試劑盒人載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒規格:96T/48T

植物葉綠體FATP(FtypeATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20

humantoll-likereceptor2,TLR2ELISAKittoll樣受體2(TLR2)ELISA試劑盒規格:96T/48T
13S-HODE cholesteryl ester 25 ug     13S-xy7noxy-9Z11E-octadecadienoic acid cholesteryl ester 13S-HODE cholesteryl ester

Darapladib 10 mg     SB 480848 N-[2-dietxylaminoetxyl]-2-[[4-fluoropxenylmetxyl]thio]-4,5,6,7-tetraxy7no-4-oxo-N-[[4-trifluorometxyl[1,1-bipxenyl]-4-yl]metxyl]-1H-cyclopentapyrimidine-1-acetamide

鬼筆環肽-Fluorescein偶聯物     Phalloidin-Fluorescein Conjugate

Dibutyl-3-xy7noxybutyl Phosphate 25 mg     dibutyl 3-xy7noxybutyl esterdibutyl 3-xy7noxybutyl ester-phosphoric acid TBP-OH Dibutyl-3-xy7noxybutyl Phosphate

Elaidic Acid 1 g     9E-octadecenoic acid trans-Oleic Acid Elaidic Acid

3aR     Cantharidin
HBVpol502, HBV polymerase (502-510)Lys-Leu-His-Leu-Tyr-Ser-His-Pro-Ile

β II probeSer-Ser-Leu-Asp-Leu-Ser-Gln-Phe-Pro-Met-Thr-Ala-Ser-Phe-Leu-Arg-Glu-Ser-Arg

[pSer5]-Kemptide, BiotinylatedBiotin-Leu-Arg-Arg-Ala-Ser(PO3H2)-Leu-Gly

Boc-GRR-AMCBoc-Gly-Arg-Arg-AMC

Pannexin-1 Fragment (4512)Val-Gln-Gln-Lys-Ser-Ser-Leu-Gln-Ser-Glu-Ser-Gly-Asn
4× 核酸液相雜交液10mL說明書聚乙二醇400Polyetxylene Glycol 400CP500mL

MD25-3.5透析袋(半周長25mm,直徑16mm,截留分子量3500Da)5/0

C0182-5gCytidine 胞嘧啶核苷65-46-35g

Long Taq DNA聚合酶250U

litxium Dodecyl Sulfate25g

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