人elisa定量檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)是不是也遇到過(guò)這些問(wèn)題?
蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗(yàn)）即Western Blot。它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過(guò)特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過(guò)分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。WB實(shí)驗(yàn)作為科研研究中實(shí)驗(yàn)其中一種方法，卻蘊(yùn)含了很多知識(shí)，可謂是小實(shí)驗(yàn)里卻有大文章。針對(duì)WB實(shí)驗(yàn)經(jīng)常遇到的一些問(wèn)題，上海滬鼎生物技術(shù)專員總結(jié)出了應(yīng)對(duì)的一系列“5點(diǎn)”注意事前及建議，希望能幫助到您！
實(shí)驗(yàn)的5點(diǎn)注意事項(xiàng)：
1.陽(yáng)性對(duì)照對(duì)裂解物用來(lái)表明實(shí)驗(yàn)室有效并且是正確的，及可證明目標(biāo)蛋白不在樣本表達(dá)。
2.跑在樣品旁邊的分子量標(biāo)準(zhǔn)能測(cè)定蛋白分子量的大小并且能監(jiān)測(cè)電泳的進(jìn)展。
3.避免手指直接接觸膜，應(yīng)使用鑷子，手指上的油脂與蛋白會(huì)封閉轉(zhuǎn)膜效率并易產(chǎn)生背景污斑。
4.確認(rèn)裁剪的膜和濾紙與凝膠尺寸相同，邊緣太大會(huì)導(dǎo)致在進(jìn)行轉(zhuǎn)膜時(shí)電流不能通過(guò)膜。
5.過(guò)度曝光的膠片不適合用于分析，因?yàn)椴荒芘卸ㄏ鄬?duì)蛋白量。
解決無(wú)信號(hào)的5點(diǎn)建議：
1.二抗需和一抗宿主的物種相同（如一抗來(lái)自兔，二抗為抗兔抗體）。原因： 一抗和二抗不匹配。
2.參照說(shuō)明書，設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照。原因：一抗不識(shí)別檢測(cè)物種蛋白。
3.每泳道蛋白上樣量不低于20~30μg，設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照。原因：抗原量不足。
4.使用可逆染色劑如麗春紅S檢測(cè)轉(zhuǎn)膜效果，檢測(cè)轉(zhuǎn)膜操作是否正確。PVDF膜預(yù)先浸在甲醇中。原因：轉(zhuǎn)膜不充分。
5. 使用含0.5%脫脂奶粉或更換封閉劑，減少封閉時(shí)間。原因：過(guò)度封閉使目標(biāo)蛋白不能顯色。
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