產(chǎn)品名稱：人角膜內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法
英文名稱：Human corneal endothelial cell culture medium
規(guī)格：100mL
產(chǎn)品貨號：FS-X0309
人角膜內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
人角膜內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法收到后的處理：
1）收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2）請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4）如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5）接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉?/a>。
培養(yǎng)操作流程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基（F-12K，GIBCO,貨號21127-022），90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換 液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
      1，細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml*，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
      2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
      3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

乙酰磺胺 標(biāo)準(zhǔn)品  號：144-80-9 250MG    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
* 標(biāo)準(zhǔn)品  號：80-32-0 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
* 標(biāo)準(zhǔn)品  號：68-35-9 100MG    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
*標(biāo)準(zhǔn)品  號： 122-11-2 250MG    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
* 標(biāo)準(zhǔn)品  號：57-68-1 250MG    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
周效磺胺 標(biāo)準(zhǔn)品  號：2447-57-6 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
磺胺胍（一水合物） 標(biāo)準(zhǔn)品  號：6190-55-2 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
磺胺甲基嘧啶 標(biāo)準(zhǔn)品  號：127-79-7 250MG    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
 新諾明 標(biāo)準(zhǔn)品  號：723-46-6 250MG    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
 * 標(biāo)準(zhǔn)品  號：80-35-3 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
 *鈉 標(biāo)準(zhǔn)品  號：1220-83-3 0.1g    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
 磺胺 標(biāo)準(zhǔn)品  號：63-74-1 250MG    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
乙?；前穼ο趸?標(biāo)準(zhǔn)品  號：122-16-7 250MG    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
 * 標(biāo)準(zhǔn)品  號：148-83-2 250MG    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
 磺胺喹噁啉 標(biāo)準(zhǔn)品  號：59-40-5 250MG    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
 * 標(biāo)準(zhǔn)品  號：72-14-0 250MG    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
甲磺草胺 標(biāo)準(zhǔn)品  號：122836-35-5 0.1G    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
乙黃隆 標(biāo)準(zhǔn)品  號：141776-32-1 50MG    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
硫丙磷 標(biāo)準(zhǔn)品  號：35400-43-2 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
苯噻氰 標(biāo)準(zhǔn)品  號：21564-17-0 25mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
戊唑醇 標(biāo)準(zhǔn)品  號：107534-96-3 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
蟲酰肼 標(biāo)準(zhǔn)品  號：112410-23-8 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
人角膜內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法吡螨胺 標(biāo)準(zhǔn)品  號：119168-77-3 0.1g    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
特丁隆 標(biāo)準(zhǔn)品  號：34014-18-1 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
四氯硝基苯 標(biāo)準(zhǔn)品  號：117-18-0 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
氟苯脲 標(biāo)準(zhǔn)品  號：83121-18-0 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
七氟菊酯 標(biāo)準(zhǔn)品  號：79538-32-2 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
 雙硫磷 標(biāo)準(zhǔn)品  號：3383-96-8 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)