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根據上海勁馬技術部解析指導，elisa試劑盒解析了細胞爬片的保存固定方法，為實驗者提供有利的實驗參考數據，

elisa試劑盒提供：*的固定及保存方法：

（1）中性緩沖福爾馬林（不必調pH）：

福爾馬林（40%甲醛，用時加入過量堿式MgCO₃中和） 10.0 ml

Na₂HPO₄.12H₂O 1.9653 g

NaH₂PO₄.2H₂O 0.5460 g

加0.85 %NaCl溶液溶解，定容至100 ml。

（2）細胞固定：待細胞接近長成單層時，用鑷子取出蓋玻片，迅速于37℃PBS中漂洗2次，每次3-5秒，以清除血清。

（3）將蓋玻片投入中性緩沖福爾馬林溶液中室溫固定30 min。

（4）用鑷子取出蓋玻片，PBS漂洗2次，每次3-5秒，晾干保存于-20℃備用。可長期保存，做實驗時，取出片子，入PBS濕潤后即可進行你的實驗。

可以用于做免疫細胞化學（H.E.)或免疫熒光。

 細胞爬片固定以后要放在-20度的冰箱，1個月內可以用。

過氧化氫處理這一步，用三蒸水稀釋商品濃度為30%的過氧化氫，然后室溫下玻片放在其中浸泡10 min，是不是過氧化氫導致細胞嚴重脫片？

爬片應該用甲醇/雙氧水，你的細胞極可能是過氧化氫導致嚴重脫片。

elisa試劑盒提供 本人比較喜歡用4%得多聚甲醛，20分鐘很好用的。保存的時候注意片子晾干，不要擠壓，防止粘片和碎裂。

 細胞爬片固定好以后，如果要保存，我們的做法是倒掉固定液，PBS漂洗后干片保存在4度，zui長半年沒問題。

elisa試劑盒提供（1）用新鮮配制的預冷的4%多聚甲醛緩沖液室溫固定15 min，PBS (0.01 mol/l，pH7.4)洗滌3遍后是否就可以進行免疫細胞化學染色了？

（2）爬片PBS (0.01 mol/l，pH7.4)洗滌3遍后是否能保存，怎樣保存？

答：（1）洗過就可以做免疫組化了。

（2）固定過后自然干燥，不要洗，-20度保存。做之前再洗。

elisa試劑盒提供 細胞固定用丙酮或酒精，不要用4%多聚甲醛，以免抗原交聯，這樣組化時不用再抗原修復。細胞固定后可室溫保存在丙酮中，不使之干燥。

1.  如果是檢測膜上的物質,好象不能用酒精。

2.  適當密度后取出固定(丙酮-20固定10～20 min)，再進行免疫染色。

3.  一批細胞爬片，如果細胞爬片是在玻璃上，冷丙酮固定15-20分鐘，然后放-20度，沒有問題。如果細胞爬片是在24孔板或6孔板里進行，冷丙酮會腐蝕板子，4%多聚甲醛。

4.  細胞爬片用純丙酮固定10分鐘，取出干燥后用錫紙包裹，-70度保存。

5.  4%多聚甲醛固定后PBS水洗，自然干燥后用錫紙包裹，-20度凍存不超過1月。

6.  如果細胞貼壁困難，可將片子先用純血清掛一層，涼干后再養細胞。

7.  可以買NUNC公司的細胞培養用蓋玻片，商品名Thermanox Coverslips。高分子材料，耐高溫滅菌，經過特殊表面處理，細胞容易貼附。可以用剪刀任意裁剪，使用效果好。

上海勁馬有現貨，不用國外定貨。我使用后，覺得效果比玻璃蓋玻片效果好很多。

8.  我們通常是把細胞玻片固定好后，用PBS沖洗干凈，然后用酒精脫水（80%，90%，，酒精各一次，每次10分鐘左右），然后放在烘箱里烘干，這是就相當于石蠟切片了，可以保存一定的時間。

這個方法我們試過的，保持一段時間后做，效果還是可以的。