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過氧化氫酶(CAT)試劑盒的檢測原理以及自備儀器

來源:上海百蕊生物科技有限公司   2015年07月01日 16:27  

上海百蕊生物代理銷售過氧化氫酶(CAT)試劑盒,現(xiàn)貨供應,歡迎。

過氧化氫酶(CAT)試劑盒測定原理H2O在 240nm 下有特征吸收峰,CA能夠分解 H2O2,使反應溶液 240nm 下的吸光度隨反 應時間而下降,根據吸光度的變化率可計算出 CAT 活性。

需自備的儀器和用品:紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、 研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配制:提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存; 試劑一:液體 30mL×1 瓶,4℃保存; 試劑二:液體 125μL×1 瓶,4℃保存。

1、細菌、細胞或組織樣品的制備

收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液, 超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置 冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節(jié)波長至 240nm,蒸餾水調零。

2CAT 檢測工作液的配制:用時在試劑二中加入 25mL 試劑一,充分混勻,作為工作液。

3、測定前將 CAT 檢測工作液在 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本和 190μL 工作液,立即混勻并計時,記錄

240nm 下初始吸光值 A11min 后的吸光值 A2。計算 ΔAA1-A2


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