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如何改進ELISA試劑盒實驗中的錯誤

來源:上海邦景實業有限公司   2020年05月11日 11:51  

ELISA試劑盒有許多實驗操作步驟,新手操作難免出錯。其中許多錯誤是由不充分的細節造成的。有很多方法可以減少這種錯誤,比如在做實驗時少說話,以防止唾液掉進酶的標簽中。當然,我們也要學會探索自己的問題,找出原因。那么,我們如何改進ELISA試劑盒實驗中的錯誤呢?

1.評估試劑的實用性,試劑的穩定與否,對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。

2.操作前仔細閱讀說明書,嚴格按照說明書要求進行規范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方,反復試驗確定成立后才能改進,比如洗板次數的掌握等。

3.加樣要準確、快速。加樣不準確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結果。另外,顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣應慎重。要求在一定時間內加樣完畢的實驗,如果加樣遲緩,便出現誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。

4.檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械,具有一定總結和分析問題的能力,對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決。

5.使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。

6.嚴格掌握顯色時間,顯色時間過短,加入終止液反應終止后,底物結合物的量過少,易出現假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應判為假陽性,這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結果。

7.洗滌*,洗板不*,酶結合物本底顯色會呈現假陽性。另外,洗滌液要新鮮,現用現配,陳舊的洗滌液會出現本底增高現象,也可能出現假陽性。

8.嚴控反應時間,反應時間過長,酶失活;反應時間過短,酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合,生成物結構松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。
 

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