使用液相色譜儀的小伙伴肯定會遇到漏氣和漏液的狀況，流動相是造成液相色譜各種問題的最主要源頭。液相色譜見的故障一是堵，二是漏。今天就這兩部分別展開討論。

為何會堵？“堵”的表現現象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，主要原因就是流動相里有雜質，雜質的主要來源就是細菌。

1、純水中的細菌污染

我們要認識到，一般的國產其實不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態微粒雜質，也能在液相流路系統前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細菌。新制備的純水在室內放置幾天就會長菌，而這些細菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配制流動相時造成的細菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。

液相色譜解決辦法：

（1）理想的方式當然是購買實驗室專用純水機，既方便又可靠，質量也放心。缺點就是價格不菲。

（2）成箱購買市售品牌純凈水，如500ml的怡寶或娃哈哈，這些水的質量足以應付液相色譜的要求。先隨機抽取一瓶做一下細菌平板實驗，待菌落數合格方可使用。這樣每次只要單獨開一瓶即可，也很方便。每次成本2元左右。這里特別指出一個細節：在絕大多數書本上，凡談到配制流動相都會談到個過濾的步驟。但是從我們長期使用的實際效果來說，只要能保證水的質量，這一步*可以也應當去除。

水有保證，可以不過濾？

（1）流動相過濾在理論上有好處，但是實際操作時由于不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染，對于配比復雜的流動相影響更大。

（2）流動相過濾在經濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元，且過濾器*是比較容易損壞的設備。最主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠遠高于色譜柱的成本上升。

2、流動相的細菌污染

流動相剛開始不長菌，在使用時卻產生了細菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的。舉的例子：50%的水流動相，有兩種使用方式。一種方式是在上機前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純，流路B放純水。從單純實驗效果來說，后一種有明顯的優點：首先是簡單，不需要實驗者另個計算配比混合，其次就是比例準確，能得到保留時間重復性實驗效果。

但是，液相色譜有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌（很多情況下不僅僅用純水作流動相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優質肥料，細菌長得更迅速），一旦有細菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水，更要求在每次實驗后把水相換掉，換成沖洗干凈，這一點在實際工作中很多人意識不強，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏，但是往往這一兩次就足以產生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。

所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復性，也不要用純水溶液作為流動相。從實際實驗效果來說，我建議用10%的水代替水溶液（以前我做過不同比例水的細菌總數實驗，在5%就基本可以抑菌，在10%及以上就可以*殺菌了），這樣可以有效排除長細菌的隱患，既可作流動相，也可沖柱。就算是在配制流動相時會計算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。

3、液相色譜不適當操作

（1）在更換零件時選擇的型號有誤，接口不是很匹配，在擰緊的時候產生變形而使得管路堵塞。

（2）樣品處理液凈化得不干凈，長期會在六通閥和柱之間形阻塞不暢。

（3）在使用用手動六通閥時，有些人可能由于手勁小的原因，轉動的不到位，于是造成流路形成死堵，壓力快速升高超過警戒值。