凝膠層析蛋白純化的實驗原理及幾種方法

來源：上海金達生化儀器有限公司 2022年06月04日 09:17

　　凝膠層析蛋白純化的實驗原理：

　　凝膠層析又稱分子排阻層析或凝膠過濾，是以被分離物質的分子量差異為基礎的一種層析分離技術，這一技術為純化蛋白質等生物大分子提供了一種非常溫和的分離方法。層析的固定相載體是凝膠顆粒，目前應用較廣的是：具有各種孔徑范圍的葡聚糖凝膠和瓊脂糖凝膠。

　　葡聚糖凝膠層析，是使待分離物質通過葡聚糖凝膠層析柱，各個組分由于分子量不相同，在凝膠柱上受到的阻滯作用不同，而在層析柱中以不同的速度移動。

　　凝膠層析蛋白純化的幾種方法：

　　1、沉淀；

　　2、電泳：蛋白質在高于或低于其等電點的溶液中是帶電的，在電場中能向電場的正極或負極移動。根據支撐物不同，有薄膜電泳、凝膠電泳等。

　　3、透析：利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。

　　4、層析：

　　a.離子交換層析，利用蛋白質的兩性游離性質，在某一特定ＰＨ時，各蛋白質的電荷量及性質不同，故可以通過離子交換層析得以分離。如陰離子交換層析，含負電量小的蛋白質先被洗脫下來。

　　b.分子篩，又稱凝膠過濾。小分子蛋白質進入孔內，滯留時間長，大分子蛋白質不能時入孔內而徑直流出。

　　5、超速離心：既可以用來分離純化蛋白質也可以用作測定蛋白質的分子量。不同蛋白質其密度與形態各不相同而分開。

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