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反相色譜柱的注意事項和維護保養

來源:成都摩爾科學儀器有限公司   2022年08月18日 08:55  

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反相色譜柱的注意事項和維護保養

  色譜柱的正確使用方法和細致的維護工作很重要,使用和維護不當會降低柱效、縮短壽命甚至損壞。在反相色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護色譜柱的高效性和******性。


一、避免壓力和溫度的急劇變化

溫度突變或使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓突然升高或降低也會沖動柱內填料,因此在調節流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩。

二、★勿直接改變溶劑組成

改變溶劑的組成時,應逐漸緩慢改變,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變為全部是水,反之亦然。

三、★禁止反沖

一般說來色譜柱不能反沖,只有生產者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。


四、流動相方面

★1.流動相須經過超聲和0.45um濾膜除去微粒;

★2.純度要求?

→超純水(HPLC用水);

→緩沖液pH值2~8;

→緩沖鹽濃度(一般10mM~20mM);

→有機溶劑(色譜純,雜質含量盡量低)。

★提示:選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),可避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱,可使流動相在進固定相之前預先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質被溶解。

五、樣品方面

1.確保樣品不和填料基質相互作用;

2.了解樣品的溶解性,若樣品的溶劑不是流動相,用流動相試溶解,防止樣品析出;

3.樣品上樣前須經過0.45um的濾膜過濾去除微粒和雜質;

4.避免將復雜的樣品尤其生物樣品直接注入柱內,在進樣器和色譜柱間連一保護柱。


六、保清潔防干燥

保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發干燥。

七、加補填料

反相色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷,使柱效下降,這時也可補加填料使柱效恢復。

八、清洗

★水/乙腈(95/5)→****乙腈→乙腈/異丙醇(75/25)→****異丙醇→****二氯甲烷→****己烷

九、再生

★30倍柱體積?正己烷→二氯甲烷→異丙醇→二氯甲烷→流動相。

★注意:若需用到二氯甲烷、己烷,使用反相流動相前需用異丙醇過渡?。

★柱子使用完后,用洗脫能力強的洗脫液沖洗色譜柱,清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時,以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗,再以相反順序依次沖洗。

十、保存??

1.存放前的處理(除去雜質、緩沖鹽);?

2.合適的存放溶劑(甲醇抑菌能力強于乙腈);?

3.避免柱床的干涸;

4.避免機械震動(輕拿輕放);?

5.存放的溫度4~30℃。?

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