多肽只能經過共價修飾或者肽鍵斷裂被毀壞。不像蛋白質是從充溢各種蛋白酶的細胞里被純化,合成的多肽被蛋白酶污染的幾率是很小很小的。固拓生物在試驗中發現在中性pH條件下,大多數生物實驗的停止速度很慢。中性條件下細菌污染可能是一個嚴重的問題(由于多肽是細菌的一種良好的營養源)。因次,實驗里用到的溶劑過濾比多肽的穩定更重要。
稱重和紫外線吸收力是兩個常用的辦法。
b. 紫外線吸收性。假如您的多肽含有一個或殘基,多肽的定量剖析就變得愈加簡單。
這在小的親水性肽,這不是問題。在水溶液中,這些肽通常采用伸展構象,一切的側鏈是完整暴露于溶劑中的。但關于長的疏水性多肽,固拓生物試驗發現這種假定是不完整正確的。有時可察看到低水平聚合和折疊。出于這個緣由,我們以為,在0.1N NaOH中,在293 nm處的吸光度是,由于在此條件下,肽是完整變性的。它的缺陷是,用于濃度測定的樣品不能被恢復。
基于上面的討論,為了多肽的濃度的準確測定,我們激烈倡議在你的多肽的N-或C-末端添加一個殘基。
肽的溶解度最終取決于它的序列。在能夠操作的條件,pH值可能是最重要的。固拓生物發現,在許多狀況下,改動1-3個pH值單位能夠使十分穩定的多肽完整溶解。過渡曲線通常是很峻峭的。在一個很窄的pH范圍內,溶液從混濁變得明澈。這可能是由于某些殘基電離狀態的改動,比方His。
關于難以溶解的肽,你能夠在有機溶劑中制備更高濃度的原液,例如DMS,并且在生物功用檢測期間稀釋肽。大多數的檢測能包容1-2%的DSMO,一些以至是5%。但是這并不是總是起作用的。一些肽當從DMSO中稀釋時以至在更低濃度時匯集和沉淀。
▲岐昱 多肽合成儀
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