海洋微微型、微型和小型浮游生物調查

技術要求和調查要素

技術要求

采水層次

采水量

浮游植物

水深大于200 m的海區,每次采水不少于1 000 cm2 ;水深小于200 m的海區不少于500 cm‘;發生富營養化或赤潮海區視具體情況而定,一般每次采水100cm3。

浮游動物

采水量依動物的密度而定,一般調查控制在1dm°~50dm'之間。在浮游動物豐富的內灣和發生動物性赤潮的水域,采水量為100 cm*。

垂直拖網深度.

水深大于200 m的海區拖網深度為200 m,水深小于200 m的海區拖網深度從底至表。

垂直分段拖網水層

根據測站深度規定采樣水層如表3(有些專項調查可視項目要求根據現場溫度、鹽度、葉綠素等躍層分段采樣)。

連續觀測時間與次數

水深小于50 m的海區每3 h采樣一次,共采9次;水深大于50 m的海區每4 h采樣一次,共采7次。

種類鑒定與計數

除需作特殊處理的微微型、微型浮游生物種類以及培養觀察的特殊類群之外,原則上鑒定到種的標本比例應在80%以上;鑒定到屬的比例應在90%以上。水采樣品每次實際標本鏡檢數不少于100個~200個;網采樣品每次實際標本鏡檢數不少于500個。

調查要素

調查要素包括微微型、微型和小型浮游生物的種類組成和豐度分布(時間、空間分布)。

采樣

采樣設備

采水器.

采水器容積可為2.5 dm3、5 dm3或10 dm3。

采泥器

根據條件采用箱式采樣器、多管采樣器或彈簧采泥器采集甲藻等孢囊樣品。

網具

根據調查海區情況和采樣對象選用,見表4。

網底管

網底管套的篩絹必須與網衣篩絹的規格相同。

網口流量計

使用前必須經過標定，每航次標定一次。

量角器

角弧形量角器。

沉錘

根據水流速度和風浪大小,使用質量為10 kg~40 kg的鉛制沉錘。

絞車及鋼絲繩

絞車變速范圍為0.3 m/s~1 m/s,并附有排纜裝置和鋼絲繩計數器，鋼絲繩直徑為3. 6 mm~5.0 mm。

吊桿

高度為5 m~6 m(深水拖網須大于6 m),負荷為500 kg~1 000 kg;吊桿的舷間距1 m左右,并能調節位置。

沖水設備

水泵、水管、水桶和吸水球等,用于沖噴收集粘貼在網衣或網底管套篩絹上的標本。

采樣前的準備

a)根據調查要素、站數、層次計算采樣數量,配以足量的樣品瓶、相應的固定劑及其他器材。

b) 固定液: 魯哥氏液(Lugol's solution):100 g溶于1 dm3蒸餾水,加人50 g碘使其溶解,再加人100 cm3冰醋酸;緩沖:商用甲醛(體積分數約為40%)加入同量蒸餾水，1 dm3 約20%的加100 g六次甲基四胺;多聚(體積分數為25%)。

海上采樣與樣品保存

微微型(光合)浮游生物

a) 主要采集特定水層個體小于2.0 μm的生物;

b)微微型浮游生物包括異養細菌和自養型生物。對于微微型光合浮游生物( photosynthetic pi-coplankton),在此只表述使用落射熒光顯微鏡,根據其所含色素的熒光特性可區分為單細胞的藍細菌(cyanobacteria)和微微型光合真核生物( photosynthetic pico-eukaryote),前者 又通常以聚球藻(Synechococcussp)占優勢;

c) 采水樣使用進口多瓶采水器或國產有機玻璃制成的2.5 dm3采水器;

d) 采集50~200 cm3水樣,加多聚固定(1%終濃度),用液氮保存。采樣情況記錄于表

微型浮游生物

a) 主要采集特定水層個體小于20 μm的微型金藻、微型甲藻、微型硅藻、無殼纖毛蟲和領鞭蟲等樣品;

b) 按預定水層和規定量采集水樣。如需去除大于20.0 μm的生物,可先用孔徑20 μm的篩絹預過濾。樣品用魯哥氏液固定,每1L水樣加人10cm*~15cm3,根據樣品的實際濃度可作適當增減。如需要對樣品做電鏡觀察分析，則選用戊二醛固定，根據樣品濃度可加人樣品體積的2%~5%。采樣情況記錄于表。

小型浮游生物

a)主要采集水柱中個體小于 200 μm的絕大部分浮游植物、無殼纖毛蟲、砂殼纖毛蟲、輪蟲、橈足類幼體、放射蟲和有孔蟲等樣品;

b)按不同水 深選用小型浮游生物網或淺水II型網進行垂直拖網，拖網速度:落網為0.5 m/s;起網為0.5 m/s~0.8 m/s,樣品用緩沖固定,加入量為樣品體積的5%,根據樣品的實.際濃度可作適當增減,并記錄于表;

c) 用手拖定性浮游植物網進行水平(可在網口三根網繩的接合點加一個使錘)或垂直拖網,樣品用魯哥氏液或緩沖固定;

d) 如需要對樣品做電鏡觀察分析,則選用戊二醛固定,根據樣品濃度可加入樣品體積的2%~5%。

孢囊

a)選擇在軟質沉積環境如海底凹處和內灣等處采集孢囊沉積物樣品;

b) 根據條件采用箱式采樣器、多管采樣器或彈簧采泥器采樣,取沉積物上部10 cm軟泥,分別用孔徑0.12mm、0.038mm和0.022mm篩網過篩，再對已過篩的樣品進行超聲波處理以去除雜質;

c)一般對樣品進行低溫避光保存,固定劑會使孢囊失去部分診斷特征,如需要長期保存,可選用緩沖固定。

樣品分析

主要儀器和設備

落射熒光顯微鏡、光學顯微鏡、倒置顯微鏡、沉降器、濾器、支架、抽濾瓶、手持泵或真空泵。

樣品編號

各類樣品須有總編號。總編號由代表采樣海區、采樣方式、使用網型、采樣年份和樣品序號等內容的代號依次組成，每份貯存樣品的瓶外須貼有總編號的外標簽,瓶內須放有總編號、站號和采樣日期等內容的內標簽,填寫表。

樣品分類鑒定與豐度測定

標本鑒定在有條件情況下采用活體與固定樣品相結合、網采與水采樣品相結合的方法,盡可能獲取水體中浮游生物群落的真實信息;定量計數一般以采水樣品為準,水柱的定量計數以網采樣品為準,網采樣品可作為種類組成分析的補充和某些個體大于拖網篩絹孔徑的種類的定量計數。

微微型光合浮游生物

a)按照預定層次量取10 cm3~50 cm3水樣;

b)通過直徑為25 mm、孔徑為0.2 μm的黑色核孔濾膜, 抽濾負壓不超過50 kPa;

c)取下濾筒,將濾膜放在載玻片.上,在濾膜上加一滴水樣,蓋上蓋玻片(濾膜兩面均不能有氣泡);

d)在落射熒光顯微鏡下使用綠光或藍光激發,一般使用40倍物鏡觀察,隨機取至少20個視野，分別計數具有光亮的桔黃色熒光的含藻紅蛋白的聚球藻細胞和呈磚紅色熒光的含葉綠素的微微型光合真核生物細胞。計數結果記錄于表。

微型和小型浮游生物鑒定與計數

沉降計數法

用于采水樣品浮游生物計數, ,計數結果記錄于表。

濃縮計數法

用于網采或采水樣品浮游生物計數 ,計數結果記錄于表。

甲藻孢囊鑒定與計數

濃縮或直接顯微計數,計數結果記錄于表。

資料整理

豐度計算

落射熒光顯微鏡計數

甲藻孢囊細胞濃度

孢囊細胞濃度以cells/cm*沉積物或cells/g沉積物干重計算。

填寫報表

按本部分的要求和規定填寫各種報表。

繪制分布圖

平面分布圖一般用等值線表示,取值標準如下:

a) 浮游植物細胞總數(網采樣品單位為10cells/m',采水樣品單位為10'cells/dm3 ): 5,10,50, 100,500,1 000,5 000,10 000;

b) 浮游植物優勢種細胞豐度(網采樣品單位為10' cells/m’， 采水樣品單位為102 cells/dm*): 1,5,10,50, 100,500,1 000,5 000;

c) 孢囊細胞豐度(單位為cells/cm'): 1,10,100;

d) 浮游動物個體豐度(網采樣品單位為10ind/m3，采水樣品單位為102 ind/dm3 ):1,5, 10,50,100。