毛細(xì)管色譜柱安裝步驟

1．檢查氣體過(guò)濾器、載氣、進(jìn)樣墊和襯管等；
2．將螺母和卡套裝在柱上，并將色譜柱兩端口小心切平；
3．將色譜柱連于進(jìn)樣口上；
4．接通載氣；
5．將色譜柱連于檢測(cè)器上；
6．進(jìn)行氣體撿漏；
7．確定載氣流量，再對(duì)色譜柱的安裝進(jìn)行檢查；
8．色譜柱的老化；
9．設(shè)置確定載氣流速；
10．柱流失檢測(cè)；
11．分析測(cè)試實(shí)驗(yàn)混合樣品。

需要的安裝工具和附件
1．切割工具如金剛石頭或碳頭筆、寶石筆頭或瓷楔；
2．放大鏡（10—20X）；
3．標(biāo)尺；
4．扳手；
5．卡套；
6．溶劑瓶；
7．干凈的注射針；
8．適用的非柱保留化合物樣品；
9．色譜柱測(cè)試混合樣品；
10．流量計(jì)；
11．其他附件：進(jìn)樣墊、干凈的襯管、襯管卡套/O形環(huán)等。

步驟1：檢查氣體過(guò)濾器、載氣、進(jìn)樣墊和襯管等
    檢查進(jìn)樣墊和氣體過(guò)濾器，保證輔助氣和檢測(cè)器用氣通暢有效。如果以前做過(guò)較臟樣品或活性較高的化合物，需要將進(jìn)樣口襯管清洗或更換。

步驟2：將螺母和卡套裝在柱上，小心切平柱子兩端口
    在色譜柱的一端裝上相應(yīng)的螺母和卡套，此時(shí)色譜柱端口無(wú)前后之分，色譜柱支架的支撐部分應(yīng)總是朝向著柱箱門(mén)。安裝好螺母和卡套后，將色譜柱端口切平，并用放大鏡進(jìn)行檢查。

［熔融石英毛細(xì)管和切割］將色譜柱所要切割的部分用一根手指頂住，用合適的切割工具（見(jiàn)需要的安裝工具和附件列表）在外壁輕輕的劃上一個(gè)標(biāo)記，不要直接進(jìn)行切割。然后捏柱子在標(biāo)記處折斷。再使用放大鏡對(duì)切割后的端口進(jìn)行檢查，以確定切口和管壁成直角，并且沒(méi)有殘留的碎屑，沒(méi)有毛邊或不平的切割面（見(jiàn)圖2）。如果沒(méi)有問(wèn)題，在切割一次。
［卡套］常用的色譜柱卡套有兩種：石墨和石墨/Vespel。如果應(yīng)用的是ECD或GC/MS 系統(tǒng)，不能使用石墨卡套。色譜柱的直徑?jīng)Q定所用卡套的內(nèi)徑（見(jiàn)表1）。使用不合適的卡套不僅難于安裝，而且很難保證連接處的密封性，注意；Agilent的6890/5890型GC所用的卡套比常規(guī)的要短。

表1。套的內(nèi)徑

步驟3：色譜柱連于進(jìn)樣口上
    色譜柱在進(jìn)樣口中的嵌入溶度根據(jù)所使用的GC不同而不同。正確合適的嵌入能zui大可能地保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性。通常來(lái)說(shuō)，色譜柱的頂端應(yīng)保持在進(jìn)樣口襯管中的中下部，當(dāng)進(jìn)樣針穿過(guò)隔墊*插入進(jìn)樣口后，如果針尖與襯管中的色譜柱頂端相差1-2cm，這就是較為理想的狀態(tài)（具體的嵌入濃度和方法參見(jiàn)所使用GC的隨機(jī)手冊(cè)）。
    從色譜柱架上取出需要連接的足夠的長(zhǎng)度，并按步驟2切割柱子，連接到進(jìn)樣口。避免用力彎曲壓擠毛細(xì)柱，并小心不要讓標(biāo)記牌等有鋒利邊緣的物品與色譜柱接觸摩擦，以防柱身斷裂或受損。
    連接螺母的安裝：將色譜柱正確嵌入進(jìn)樣口后，用手把連接螺母擰上，擰緊后（用手?jǐn)Q不動(dòng)了）用鈑手再多擰1/4-1/2圈，如果色譜柱還有松動(dòng)，在擰1/4圈，保證安裝的密封程度。因?yàn)椴痪o密和安裝，不僅會(huì)引起裝置的泄漏，而且有可能對(duì)色譜造成快速*的損害。在螺母*連接后，小心不要再將色譜柱柱上下移動(dòng)。
    注意：如果在進(jìn)樣口或檢測(cè)器有一定溫度時(shí)安裝色譜柱，安裝效果可能會(huì)更好，因?yàn)榭ㄌ祝貏e是那些材質(zhì)為石墨/Vespel的，在一定溫度下會(huì)軟化，易變形，也就更容易封住所要密封的部位。色譜柱裝好后，等進(jìn)樣口或檢測(cè)器的溫度降下來(lái)，再安裝其他部件。

步驟4：接通載氣
    當(dāng)色譜柱與進(jìn)樣口連接好后，接通載氣。調(diào)節(jié)柱前壓力得到合適的載氣流速（見(jiàn)表2）。在色譜柱的另一端（空端），插入裝有己烷的樣品瓶中，正常情況下，我們可以看見(jiàn)瓶中穩(wěn)定持續(xù)的氣泡，如果沒(méi)有氣泡，就要重新檢查一下整個(gè)氣路有無(wú)泄漏。等所有問(wèn)題解決后，將色譜柱端口從瓶中取出，擦拭干凈，保證柱端口無(wú)溶劑殘留，再進(jìn)行下一部安裝。

  警告：當(dāng)空氣中氫氣的含量在4-10%時(shí)，這樣的混合氣體就有爆炸的危險(xiǎn)。雖然氣體本身的擴(kuò)散會(huì)降低爆炸的可能，但還是有一定的危險(xiǎn)性，所以一定要保證實(shí)驗(yàn)室有良好的通風(fēng)系統(tǒng)，防止氫氣過(guò)分的聚集。

表2。柱前壓設(shè)置（pisig）

以上僅為建議的起始設(shè)置，具體數(shù)值要依據(jù)實(shí)際的載氣速率，或如步驟9中的流量設(shè)置而定。

步驟5：將色譜柱連于檢測(cè)器上
  其安裝和所需注意的事項(xiàng)與以上色譜柱與進(jìn)樣口聯(lián)接（步驟3）部分所講述的大致相同。如果在應(yīng)用中系統(tǒng)所使用的是ECD或是NPD等，那么在老化色譜柱時(shí)，使它不與檢測(cè)器相接，那么這一類(lèi)的檢測(cè)器會(huì)更快地達(dá)到穩(wěn)定，關(guān)于色譜柱老化請(qǐng)見(jiàn)步驟8的內(nèi)容。

步驟6：進(jìn)行氣體檢漏
  在色譜柱加熱前，一定要對(duì)GC系統(tǒng)進(jìn)行檢漏，當(dāng)我們對(duì)進(jìn)樣口和檢測(cè)器進(jìn)行載氣撿漏時(shí)，使用電子檢漏是zui為有效的方法之一。建議不要使用Snoop等肥皂泡，它有可能由被檢測(cè)處進(jìn)入色譜柱和其它裝置中，從而對(duì)系統(tǒng)有所損害。而且不能使用Snoop對(duì)正在加熱的進(jìn)樣口和檢測(cè)器裝置進(jìn)行檢漏。如果一定要用液體檢漏，建議使用50/50的異丙醇/水的混合溶液。

步驟7：確定載氣流量，再對(duì)色譜柱的安裝進(jìn)行檢查
  警告：如果不通入載氣就對(duì)色譜柱進(jìn)行加熱操作，就會(huì)快速并且*性地?fù)p壞色譜柱。當(dāng)色譜柱安裝好后，在依照步驟4對(duì)載氣流量進(jìn)行確定，或者使用非保留化合物樣品進(jìn)行檢測(cè)，我們可以通過(guò)分析得到的樣品譜圖來(lái)確定進(jìn)樣口和檢測(cè)器的安裝是否正確。表3中列出了常用的非保留化合物樣品。

   實(shí)驗(yàn)過(guò)程：如果使用分流/不分流進(jìn)樣口，將色譜柱的溫度保持在35-40 ℃，使用分流模式進(jìn)1-2mL樣品。如果使用的是不分流大口徑進(jìn)樣口，由于樣品不被分流進(jìn)樣，進(jìn)樣前應(yīng)先對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)悦獾玫斤柡偷钠筋^峰形。這樣，我們應(yīng)該得到一張峰形尖銳的譜圖，而使用不分流大口徑進(jìn)樣口，色譜柱可能會(huì)有輕微拖尾。如果得不到色譜圖，有可能是根本就沒(méi)有載氣通過(guò)系統(tǒng)。那就需檢查一下調(diào)節(jié)器、氣體附件和流量控制器的設(shè)置是否正確。當(dāng)然也可能是檢測(cè)器、記錄儀和注射針等出了問(wèn)題。如果色譜峰有明顯的拖尾現(xiàn)象，可能是進(jìn)樣口有泄漏，或是色譜柱安裝不完整，也有可能是分流比設(shè)置得太低等。我們需要重新對(duì)色譜柱進(jìn)行安裝并對(duì)進(jìn)樣口進(jìn)行檢漏。只有完*了這個(gè)問(wèn)題，才能進(jìn)行下一步。

表3。常用的非保留化合物樣品

1．對(duì)于PLOT柱，以上大多數(shù)化合物都有明顯地保留吸附
2．不要直接液體進(jìn)樣；建議使用頂空進(jìn)樣裝置
3．當(dāng)溫度小于是100℃時(shí)，乙腈在大多數(shù)的色譜中都有保留。使用時(shí)需將色譜柱的溫度提高到100℃或設(shè)置更高的線速度

步驟8：色譜柱的老化
  色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后，就可以對(duì)色譜柱進(jìn)行老化了。對(duì)色譜柱升至一恒定溫度，通常為其溫度上限。特殊情況下，可加熱至高于zui高操作10-20℃左右。但是一定不能超過(guò)色譜柱的溫度上限，那樣極易損壞色譜柱。升溫速度一定要快，不要將程序聲升溫的速度設(shè)定的太慢。當(dāng)?shù)玫嚼匣瘻囟群螅涗洸⒂^察基線。比例放大基線，以便容易觀察。初始階段，基線應(yīng)持續(xù)上升，在到達(dá)老化溫度后5-10分鐘開(kāi)始下降，并且會(huì)持續(xù)30-90分鐘。當(dāng)達(dá)到一個(gè)固定的值后，基線就會(huì)穩(wěn)定下來(lái)。如果在2-3小時(shí)后基線仍無(wú)法穩(wěn)定在15-20分鐘后仍無(wú)明顯的下降趨勢(shì)，那么有可能系統(tǒng)裝置有泄漏或污染。遇到這樣的情況，應(yīng)立即將柱溫降至40℃以下，盡快地檢查系統(tǒng)并解決相關(guān)問(wèn)題。如果還是繼續(xù)地老化，不僅對(duì)色譜柱有損害，而且始終得不到正常穩(wěn)定的基線。另外，老化的時(shí)間也不宜過(guò)長(zhǎng)，不然會(huì)降低色譜柱的使用壽命。
 
  一般來(lái)說(shuō)，涂有極性固定相和較厚涂層的色譜柱老化時(shí)間較長(zhǎng)，而弱極性固定較厚涂層的色譜柱所需的時(shí)間較短。而PLOT色譜柱的老化方法又各不相同，具體步驟請(qǐng)參閱隨柱子的操作說(shuō)明書(shū)。

  如果在色譜柱沒(méi)有與檢測(cè)器連接就進(jìn)行老化，那么老化后，色譜柱末端部分可能已被破壞。要先把柱子末端10-20cm部分截去，再將色譜柱連接到檢測(cè)器上。

  溫度限定是指色譜柱能夠正常使用的應(yīng)用溫度范圍。如果操作溫度低于色譜柱的溫度下限，那么分離效果和峰形都不會(huì)很理想。但這樣對(duì)色譜柱本身并無(wú)什么損害。

  溫度上限通常有兩個(gè)數(shù)值，數(shù)值較低的是恒溫極限。在此溫度下，色譜柱可以正常使用，而且無(wú)具體的持續(xù)時(shí)間限制。較高的數(shù)值是程序升溫極限。該溫度的持續(xù)時(shí)間通常不多于十分鐘。高于溫度上限的操作則會(huì)降低色譜柱的使用壽命。

步驟9：設(shè)置確認(rèn)載氣流速
  對(duì)于毛細(xì)管色譜柱，載氣的種類(lèi)高純氦氣或氫氣。建議不要使用氮?dú)庾鲚d氣。載氣的純度大于99.995%，而其中的氧氣含量越少越好。通常載氣級(jí)或超高純度氦氣和氫氣中氧氣的含量小于2ppm。
  如果您使用的是毛細(xì)管色譜柱，那么依照載氣的平均線速度（載氣流動(dòng)的速度cm/sec）而不是利用載氣流速（載氣流量mL/min）來(lái)對(duì)載氣作出評(píng)價(jià)，這樣不僅簡(jiǎn)單而且非常方便。因?yàn)橹У挠?jì)算采用的是載氣的平均線速度，而不是體積流速。

我們進(jìn)一針?lè)潜Ａ魳悠罚ㄒ?jiàn)表3），確定它的保留時(shí)間。然后按下列公式計(jì)算平均線速度（V）
V = L/tr
V = 平均線速度（cm/sec）
L = 平均線速度（cm/sec）
tr = 非保留樣品色譜峰的保留時(shí)間（sec）
推薦平均線速度值：He，30-40 cm/sec；H2，50—80cm/sec

  不要使用色譜儀上的流量計(jì)去設(shè)置載氣流速，可能不準(zhǔn)，表4中列出了非保留樣品色譜峰的保留時(shí)間和對(duì)應(yīng)的流速范圍。大多數(shù)情況下，采用流速范圍的中間值較為合適，載氣速度（流速）會(huì)隨著柱溫的改變而改變，請(qǐng)?jiān)跍囟群愣ǖ那闆r下測(cè)量其具體數(shù)值。