聚合酶鏈PCR反應(yīng)技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。聚合酶鏈PCR反應(yīng)技術(shù)的特點(diǎn)集合如下：

1、特異性強(qiáng)

決定 PCR 反應(yīng)特異性的因素有:①引物與模板 DNA 特異分子的正確結(jié)合;②堿基配對(duì)原則;③ Taq DNA 聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;④靶基因的特異性與保守性。其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,它取決于所設(shè)計(jì)引物的特異性及退火溫度。在引物確定的條件下,PCR 退火溫度越高,擴(kuò)增的特異性越好。Taq DNA 聚合酶的耐高溫性質(zhì)使反應(yīng)中引物能在較高的溫度下與模板退火,從而大大增加 PCR 反應(yīng)的特異性。

2、靈敏度高

從 PCR 的原理可知,PCR 產(chǎn)物的生成是以指數(shù)形式增加的,即使按75%的擴(kuò)增效率計(jì)算,單拷貝基因經(jīng)25次循環(huán)后,其基因拷貝數(shù)也在一百萬(wàn)倍以上,即可將極微量(皮克級(jí))DNA 擴(kuò)增到紫外光下可見(jiàn)的水平(微克級(jí))。

3、簡(jiǎn)便快速

現(xiàn)已有多種類型的 PCR 自動(dòng)擴(kuò)增儀,只需把反應(yīng)體系按一定比例混合,置于儀器上,反應(yīng)便會(huì)按所輸入的程序進(jìn)行,整個(gè) PCR 反應(yīng)在數(shù)小時(shí)內(nèi)就可完成。擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)也比較簡(jiǎn)單:可用電泳分析,不用同位素,無(wú)放射性污染,易推廣。

4、對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總 RNA 均可作為擴(kuò)增模板。可直接用各種生物標(biāo)本(如血液、體腔液、毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等)的 DNA 粗制品擴(kuò)增檢測(cè)。