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細菌脂多糖(LPS)提取試劑盒100T實驗方法

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  • 更新時間2017-07-05
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細菌脂多糖(LPS)提取試劑盒100T實驗方法 產品詳情

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細菌脂多糖(LPS)提取試劑盒100T實驗方法儲存條件:2-8℃保存。

有效期:一年。

產品簡介:

脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌細胞壁外膜的主要成分,結構很復雜、熱穩定性*(在250℃下干熱滅菌2h才*滅活)。受LPS發現的歷史原因,如今LPS的概念幾乎等同于內毒素(endotoxin)。LPS由多糖鏈和脂質A組成,不同細菌間的多糖鏈是高度變化的,決定細菌的血清型;而脂質A主要影響LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的級聯反應和機體的毒理活動,包括釋放內毒素引起感染性休克從而導致末梢血管虛脫。臨床常通過檢測LPS的存在來診斷腦膜炎。

細菌脂多糖(LPS)提取試劑盒100T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細胞培養液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
1)取 1060 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養液中,細胞培養液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
細菌脂多糖(LPS)提取試劑盒100T實驗方法注意事項
1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4下操作,以免影響細胞狀態。
5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
7PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
可可Cocoa Theobromine 83-67-0 C7H8N4O2 98%

右旋四輕巴馬汀cright-hcndqdfourxy7nogqnbcrMcrtin320-14-720mg

毛冬青皂苷甲;毛冬青皂甙甲 Ilexsaponin A1 20mg HPLC98% 用于含量測定

HPLC法含量測定*100883-200601常溫,避光100mg

靈芝酸B Ganoderic acid B 81907-61-1 20mg HPLC98% 用于含量測定
298-46-4 *標準品 100mg

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野柏合減Monocrotclinq312--020mg

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