我公司提供原代細胞、細胞系、細胞株和菌種,細胞庫管理規范,提供的細胞株背景清楚,提供參考文獻和*培養條件。純度可達 90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
人前列腺上皮細胞提取物直銷 | T25m2 | CS-963981 |
人前列腺上皮細胞提取物【Human Prostate : Normal Prostate Epithelial Cell Derivatives】人前列腺上皮細胞提取物是從人前列腺上皮細胞提取的,人前列腺上皮細胞從正常人前列腺組織制備。正常人前列腺組織采集自各地方醫院,采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞處理方法:
以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據到貨時細胞密度,細胞生長狀態等具體情況,酌情處理,如需要更詳細技術指導,請及時電話或郵件聯系。
一.貼壁細胞
客戶接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養瓶外部。
肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細胞,當細胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細胞應該在37度培養箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度,培養瓶應預留一部分培養基繼續培養。
嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細胞。換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2 培養。
二.懸浮細胞
1. 接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4. 將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細胞。 換新的細胞培養瓶和新鮮培養基,37℃,5%CO2 培養1168-87-2 Z-Ala-ONp 100g Acinetobacter lwoffi魯氏不動桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
1168-87-2 Z-Ala-ONp 25g Histoplasma capsulatum var. farciminosum莢膜組織胞漿菌馬皮疽變種探針法熒光定量PCR試劑盒
116939-85-6 Boc-Met-Pro-OH 1g Acinetobacter lwoffi魯氏不動桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
116939-85-6 Boc-Met-Pro-OH 5g Lymphocytic Choriomeningitis Virus(LCMV)淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
1169483-24-2 AMG 853 10mg Lymphocytic Choriomeningitis Virus(LCMV)淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
CD70 Others Human CD70 / CD27L / TNFSF7 細胞裂解液 (陽性對照) 百蕊草素I;山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷;阿福豆苷(標準品)Kaempferol-3-O-glucorhamnoside質量規格:HPLC≥98%,標準品
肝永生化細胞;THLE-3寶藿苷I,羊藿苷II(標準品)Baohuoside I質量規格:HPLC≥98%,標準品
大鼠腦膜細胞(RMC)(5×105)貝母素甲(標準品)Peimine質量規格:HPLC≥99%,標準品
CM-H048胃粘膜上皮細胞*培養基100mL貝母素乙(標準品)Peiminine質量規格:HPLC≥99%,標準品
小鼠神經母細胞瘤細胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] 小鼠卵巢顆粒細胞*培養基 100mL貝母辛(標準品)Peimisine質量規格:HPLC≥98%,標準品
人前列腺上皮細胞提取物直銷兔角膜前基質層成纖維細胞;RCFBF 癌細胞,MCF7細胞 Cl.Ly1+2-/9細胞,小鼠T細胞吡非尼酮,哌非尼酮質量規格:>98.5%,BR,可用于細胞培養Pirfenidone
臍靜脈內皮細胞;HUV-EC-C吡非尼酮,哌非尼酮(標準品)質量規格:HPLC>99%,標準品Pirfenidone
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/goose/Guiyang/337/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細胞裂解液 (陽性對照) 胞1膽堿鈉;5-胞苷二1酸單鈉鹽質量規格:>98%,BRCiticoline
CL-0460U14-GFP(小鼠子細胞)5×106cells/瓶×2硬脂酸紅霉素質量規格:USPErythromycin stearate
AACS Others Human AACS / Acetoacetyl-CoA 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 精胺質量規格:>98%,BRSpermine
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。