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  • 更新時間2019-09-20
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*0 電擊感受態細胞 50ul*5運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
*0 電擊感受態細胞 50ul*5-生命科學儀器 產品詳情

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產品名稱*0 電擊感受態細胞 50ul*5
包裝50ul*5
分類克隆感受態細胞

培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
操作方法:
1. 從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質?;蜻B接產物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15小時。

 bFGF-9 小鼠堿性成纖維細胞生長因子9 規格: 48T/96T

 bFGF-6 小鼠堿性成纖維細胞生長因子6 規格: 48T/96T

 bFGF-4 小鼠堿性成纖維細胞生長因子4 規格: 48T/96T

 bFGF 小鼠堿性成纖維細胞生長因子 規格: 48T/96T

 TAb 小鼠甲狀腺素抗體 規格: 48T/96T

 T4 小鼠甲狀腺素 規格: 48T/96T

 TG 小鼠甲狀腺球蛋白 規格: 48T/96T

 TPO 小鼠甲狀腺過氧化物酶 規格: 48T/96T

 PTHrP 小鼠甲狀旁腺激素相關蛋白 規格: 48T/96T

 PTH 小鼠甲狀旁腺激素 規格: 48T/96T

 AFP 小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白 規格: 48T/96T

 Methylase 小鼠甲基化酶 規格: 48T/96T

 SDF-1β/CXCL12 小鼠基質細胞衍生因子1β 規格: 48T/96T

 SDF-1a/CXCL12 小鼠基質細胞衍生因子1a 規格: 48T/96T

 TIMP-4 小鼠基質金屬蛋白酶抑制因子4 規格:

2-氯-6-羥基* 38025-90-0

4-氨基四氫吡喃 38041-19-9

二氟乙酸 381-73-7

3-氯-2-氰基吡啶 38180-46-0

2-氯-5-氟* 38186-88-8

*0 電擊感受態細胞 50ul*52-氨基-5-溴* 38191-34-3

5-溴-2-羥基嘧啶 38353-06-9

三氟乙酸乙酯 383-63-1

3-氯-2,4-二氟硝基苯 3847-58-3

2-肟氰乙酸乙酯 3849-21-6

2,6-二氯* 38496-18-3

2,6-二氟苯甲酸 385-00-2

3-氟-2-硝基* 385-01-3

2-氟-6-硝基苯甲酸 385-02-4

2-氯-6-甲氧基-3-硝基吡啶 38533-61-8

2,3-二氟溴苯 38573-88-5

1,3-環戊二酮 3859-41-4

2,3,4-三氟苯胺 3862-73-5

3,4-二氟苯胺 3863-11-4

6-三氟甲基吡啶-3-醛 386704-12-7

喹啉-8-甲醛 38707-70-9

4-氟吲哚 387-43-9

7-氟吲哚 387-44-0

48T/96T

注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?;蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?;蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟:
1.取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態細胞為例。
2.待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA,通常100        μl感受態細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇
 5.根據實驗需求,取適量已轉化的感受態細胞,加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養,37℃培養12-16小時。

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