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產品名稱 | *0 電擊感受態細胞 50ul*5 |
包裝 | 50ul*5 |
分類 | 克隆感受態細胞 |
培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
操作方法:
1. 從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質?;蜻B接產物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15小時。
bFGF-9 小鼠堿性成纖維細胞生長因子9 規格: 48T/96T
bFGF-6 小鼠堿性成纖維細胞生長因子6 規格: 48T/96T
bFGF-4 小鼠堿性成纖維細胞生長因子4 規格: 48T/96T
bFGF 小鼠堿性成纖維細胞生長因子 規格: 48T/96T
TAb 小鼠甲狀腺素抗體 規格: 48T/96T
T4 小鼠甲狀腺素 規格: 48T/96T
TG 小鼠甲狀腺球蛋白 規格: 48T/96T
TPO 小鼠甲狀腺過氧化物酶 規格: 48T/96T
PTHrP 小鼠甲狀旁腺激素相關蛋白 規格: 48T/96T
PTH 小鼠甲狀旁腺激素 規格: 48T/96T
AFP 小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白 規格: 48T/96T
Methylase 小鼠甲基化酶 規格: 48T/96T
SDF-1β/CXCL12 小鼠基質細胞衍生因子1β 規格: 48T/96T
SDF-1a/CXCL12 小鼠基質細胞衍生因子1a 規格: 48T/96T
TIMP-4 小鼠基質金屬蛋白酶抑制因子4 規格:
2-氯-6-羥基* 38025-90-0
4-氨基四氫吡喃 38041-19-9
二氟乙酸 381-73-7
3-氯-2-氰基吡啶 38180-46-0
2-氯-5-氟* 38186-88-8
*0 電擊感受態細胞 50ul*52-氨基-5-溴* 38191-34-3
5-溴-2-羥基嘧啶 38353-06-9
三氟乙酸乙酯 383-63-1
3-氯-2,4-二氟硝基苯 3847-58-3
2-肟氰乙酸乙酯 3849-21-6
2,6-二氯* 38496-18-3
2,6-二氟苯甲酸 385-00-2
3-氟-2-硝基* 385-01-3
2-氟-6-硝基苯甲酸 385-02-4
2-氯-6-甲氧基-3-硝基吡啶 38533-61-8
2,3-二氟溴苯 38573-88-5
1,3-環戊二酮 3859-41-4
2,3,4-三氟苯胺 3862-73-5
3,4-二氟苯胺 3863-11-4
6-三氟甲基吡啶-3-醛 386704-12-7
喹啉-8-甲醛 38707-70-9
4-氟吲哚 387-43-9
7-氟吲哚 387-44-0
48T/96T
注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?;蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?;蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟:
1.取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態細胞為例。
2.待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇
5.根據實驗需求,取適量已轉化的感受態細胞,加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養,37℃培養12-16小時。