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產品名稱 | DH5α 感受態細胞100ul*20 |
包裝 | 100ul*20 |
分類 | 克隆感受態細胞 |
培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
操作方法:
1. 從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15小時。
磷酸化脊髓小腦失調癥蛋白1抗體 fPSA ELISA Kit 游離前列腺特異性抗原(fPSA)ELISA試劑盒
磷酸化活化轉錄因子1抗體 FT4 ELISA Kit 游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒
磷酸化活化復制因子2抗體 F-TESTO ELISA Kit 游離睪酮(F-TESTO)ELISA試劑盒
磷酸化活化復制因子2抗體 FP-S ELISA Kit 游離蛋白S(FP-S)ELISA試劑盒
磷酸化活化復制因子2抗體 FE3 ELISA Kit 游離雌三醇(FE3)ELISA試劑盒
磷酸化活化復制因子2抗體 f-βhCG ELISA Kit 游離β絨毛膜*(f-βhCG)ELISA試劑盒
磷酸化活化復制因子2抗體 Hp-IgG ELISA Kit 幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒
磷酸化活化復制因子2抗體 Hp-IgM ELISA Kit 幽門螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA試劑盒
活化轉錄因子5抗體 HP-CagA-IgG ELISA Kit 幽門螺桿菌細胞毒素相關基因蛋白A-IgG(HP-CagA-IgG)ELISA試劑盒
活化轉錄因子6β抗體 EL ELISA Kit 優球蛋白(EL)ELISA試劑盒
AICAR甲酰基轉移酶抗體 SOST ELISA Kit 硬骨素(SOST)ELISA試劑盒
磷酸化毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗體 IHH ELISA Kit 印度刺猬因子(IHH)ELISA試劑盒
ATP5E蛋白抗體 NLRP3/C1orf7/CIAS1/NALP3/PYPAF1 ELISA Kit 隱熱蛋白(NLRP3/C1orf7/CIAS1/NALP3/PYPAF1)ELISA試劑盒
RRM2B MHCⅡ/HLA-Ⅱ ELISA Kit ABI基因家族成員3結合蛋白抗體 人 RRM2B / P53R2 ELISA配對抗體 主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)ELISA試劑盒
IL1R1 MHCⅠ/HLAⅠ ELISA Kit Rho GTP酶激活蛋白20抗體 大鼠 IL-1R1 / CD121a ELISA配對抗體 主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA試劑盒
CD86 MVP ELISA Kit 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族10抗體 大鼠 CD86 / B7-2 ELISA配對抗體 主要穹窿蛋白(MVP)ELISA試劑盒
CD209B Ntn4 ELISA Kit 乙醛脫氫酶1蛋白家族L1抗體 小鼠 SIGNR1 / CD209b ELISA配對抗體 軸突生長誘向因子4(Ntn4)ELISA試劑盒
IL1B Ntn1 ELISA Kit 軸抑制蛋白2抗體 人 IL-1 beta / IL1B / IL-1F2 ELISA配對抗體 軸突生長誘向因子1(Ntn1)ELISA試劑盒
F9 CDK-7 ELISA Kit 血管生成素相關蛋白6抗體 人 Coagulation Factor IX / FIX / F9 ELISA配對抗體 周期素依賴性激酶7(CDK-7)ELISA試劑盒
FCGR2A CDK5 ELISA Kit Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體 食蟹猴 CD32a / Fc gamma RIIA / FCGR2A ELISA配對抗體 周期素依賴性激酶5(CDK5)ELISA試劑盒
CD44 CDK-4 ELISA Kit *蛋白激酶受體A8抗體 人 CD44 ELISA配對抗體 周期素依賴性激酶4(CDK-4)ELISA試劑盒
CR2 CDK-2 ELISA Kit 脂肪酰*家族成員1抗體 人 CD21 ELISA配對抗體 周期素依賴性激酶2(CDK-2)ELISA試劑盒
CD19 CDK-1 ELISA Kit 芳香烴受體核轉錄蛋白樣2抗體 人 CD19 ELISA配對抗體 周期素依賴性激酶1(CDK-1)ELISA試劑盒
AFP RAG-2 ELISA Kit 磷酸化芳香胺N-乙酰化轉移酶抗體 人 AFP / alpha-fetoprotein ELISA配對抗體 重組激活基因2(RAG-2)ELISA試劑盒
REG4 RAG-1 ELISA Kit 肌動蛋白結合蛋白1抗體 人 REG4 ELISA配對抗體 重組激活基因1(RAG-1)ELISA試劑盒
ENG NE-B ELISA Kit 粘附分子IgG樣結構域蛋白2抗體 小鼠 Endoglin / CD105 / ENG ELISA配對抗體 重酒石酸*(NE-B)ELISA試劑盒
FAS TAF ELISA Kit 肌動蛋白結合蛋白DOC6抗體 人 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 ELISA配對抗體 腫瘤血管生長因子(TAF)ELISA試劑盒
ICAM1 TAA ELISA Kit AFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟失調蛋白28抗體 大鼠 ICAM-1 / CD54 ELISA配對抗體 腫瘤相關抗原(TAA)ELISA試劑盒
DH5α 感受態細胞100ul*20PLXDC1 TSTA ELISA Kit 激活素受體相互作用蛋白1抗體 人 TEM7 / PLXDC1 ELISA配對抗體 腫瘤特異性移植抗原(TSTA)ELISA試劑盒
SEMA4D TSGF ELISA Kit 醛固酮類還原酶家族7成員A2抗體 小鼠 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 ELISA配對抗體 腫瘤特異性生長因子(TSGF)ELISA試劑盒
注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟:
1.取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態細胞為例。
2.待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇
5.根據實驗需求,取適量已轉化的感受態細胞,加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養,37℃培養12-16小時。