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DH5α 感受態細胞100ul*20-生命科學儀器

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  • 所在地上海市
  • 更新時間2019-09-17
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創  新 點:
2020-02-28
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上海莼試生物技術有限公司Shanghai C-reagent Biotechnology  Co. Ltd.  專業服務于生命科學領域,擁有分子生物學、醫學、藥學、化學等方面的科研技術團隊,經營科研生化試劑、分析試劑、實驗耗材,推出技術*、質量穩定的科研產品。為全國乃至于世界各地科研機構、工業、電子、醫療、科技等領域的客戶,提供系統的產品資源及配套技術服務。推出十幾個種類產品線,部分產品接受定制服務!


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DH5α 感受態細胞100ul*20運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
DH5α 感受態細胞100ul*20-生命科學儀器 產品詳情

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產品名稱DH5α 感受態細胞100ul*20
包裝100ul*20
分類克隆感受態細胞

培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
操作方法:
1. 從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15小時。

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注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟:
1.取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態細胞為例。
2.待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA,通常100        μl感受態細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇
 5.根據實驗需求,取適量已轉化的感受態細胞,加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養,37℃培養12-16小時。

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