操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
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產品名稱 | |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 |
貨號 | BJ-X97512 |
商品屬性：
名稱 源NK細胞 2.組織來源：外周血 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 人NK細胞分離自人外周血單個核細胞；NK細胞即自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調節有關，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發生，能夠識別靶細胞、殺傷介質。NK細胞來源于骨髓淋巴樣干細胞，其分化、發育依賴于骨髓及胸腺微環境，主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴結。NK細胞不同于T、B細胞，是一類無需預先致敏就能非特異性殺傷腫瘤細胞和病毒感染細胞的淋巴細胞。由于NK細胞的殺傷活性無MHC限制，不依賴抗體，因此稱為自然殺傷活性。NK細胞胞漿豐富，含有較大的嗜天青顆粒，顆粒的含量與NK細胞的殺傷活性呈正相關。NK細胞作用于靶細胞后殺傷作用出現早，在體外1小時、體內4小時即可見到殺傷效應。NK細胞的靶細胞主要有某些腫瘤細胞（包括部分細胞系）、病毒感染細胞、某些自身組織細胞（如血細胞）、寄生蟲等，因此NK細胞是機體抗腫瘤、抗感染的重要免疫因素，也參與第Ⅱ型超敏反應和移植物抗宿主反應。 5.方法簡介： ()實驗室分離的人外周血NK細胞采用取外周血、通過密度梯度離心、差速貼壁、細胞因子誘導法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： ()實驗室分離的人源NK細胞經CD56免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 培養基含IL-2、IL-15、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-H168 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性懸浮 細胞形態短梭形 傳代特性可傳5代左右；3代以內狀態最佳 消化液0.25% 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
犬CD6分子(CD6)免疫試劑盒*直銷
馬免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒進口、組裝
大鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)免疫試劑盒*直銷
大鼠抗鏈球菌溶血素O抗體(IgG)免疫試劑盒*直銷
大鼠Toll樣受體7(TLR-7)免疫試劑盒*直銷
革蘭氏陽性菌增菌液 英文名稱：Gram Positive Bacteria Enrichment Broth 產品規格：250g
UBA培養基 英文名稱：UBA Medium 產品規格：250g
1/2B5培養基（不含瓊脂和蔗糖） 英文名稱：1/2 B5ows\system32\EhStorShell.dll
源NK細胞Radic aconiti kusnezoffii preparata制草烏LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Rabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗狗IgG 規格: 0.1ml
Fructus aurantii immaturus枳實PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Tat 細胞酪轉氨抗體 規格: 0.2ml
Staphylococcus arlettae阿爾萊特葡萄球LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Notch3/4 跨膜受體蛋白Notch-3抗體 規格: 0.1ml
Norwalk Viruses G5(NV-5)諾如病毒G5型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周fowl typhoid and pullorum disease 雞白痢、雞傷寒抗體 規格: 0.2ml
Lignum dalbergiae odoriferae降香探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Mycobacterium bovis 牛結核桿菌菌體蛋白抗體 0.2ml
Brucella microti田鼠布魯氏LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CNGA2 環核苷酸陽離子通道蛋白α2抗體 規格: 0.1ml
Oropouche病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周5-HTR4 5-羥色胺受體4抗體 0.1ml
Matrii sulfas exsiccatus玄明粉LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Goat Anti-Bovine IgG/FITC FITC標記的羊抗牛IgG 規格: 0.3ml
人參源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-mouse IgM/Cy7 Cy7標記的兔抗小鼠IgM 規格: 0.1ml
Avibacterium paragallinarum副雞禽桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周SCG3/SgIII 分泌粒蛋白3抗體 規格: 0.1ml
