【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
商品介紹
測定意義 LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應,伴隨著NAD+/NADH之間互變。 測定原理: LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
② 細菌/細胞樣本:
先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通常可以使測定正常。
Rhizobium galegaeJOE因子檢測試劑盒
Rhizobium galegaeCD47蛋白檢測試劑盒
Rhizobium galegae帶3蛋白檢測試劑盒
Rhizobium galegae抗角蛋白抗體檢測試劑盒
Rhizobium galegae促泌素檢測試劑盒
Rhizobium galegae硫代嘌呤S-甲基轉移檢測試劑盒
Rhizobium galegae早期分泌抗原靶6檢測試劑盒
Rhizobium galegae血管性血友病因子裂解檢測試劑盒
核酸提取及純化試劑盒草 Standard for GC,≥99.6% 大鼠金屬轉運蛋白1(MTP1)免疫試劑盒DNA復制抑制因子抗體HPR 結合珠蛋白相關蛋白抗體
草 ≥99.998% (metals basis)大鼠金屬硫蛋白2(MT-2)免疫試劑盒G蛋白α抑制蛋白2抗體HPL/PL 人胎盤泌素抗體
草 ≥99.9999% (metals basis)大鼠金屬硫蛋白(MT)免疫試劑盒G蛋白偶聯受體γ4抗體HPGD/PGDH1/Prostaglandin dehydrogenase 1 前列腺素脫氫1抗體
4-溴磺酰 98%大鼠解整合素樣金屬蛋白9(ADAM9)免疫試劑盒G氨丁B型受體2抗體HPCL2 植烷酰輔A羥化2抗體
3-環己 99%大鼠解整合素樣金屬蛋白8(ADAM8)免疫試劑盒葡萄糖調節蛋白78抗體(熱休克蛋白70蛋白5)HP1 gamma 異染色質蛋白1-γ抗體
上光油鐵罐(直徑127mm*250mm)大鼠解整合素樣金屬蛋白19(ADAM19)免疫試劑盒葡萄糖調節蛋白94抗體HP1 alpha 異染色質蛋白1-α(HP1α)抗體
上光油鐵罐 直徑73mm*高度150mm大鼠睫狀神經營養因子(CNTF)免疫試劑盒糖原合激-3β抗體HOXD10 同源盒蛋白HOXD10抗體
天然黃蜂蠟 醫藥級(CP2005版)大鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)免疫試劑盒糖原合激-3β抗體HOXC9 同源盒蛋白HOXC9抗體
酵母DNAout(見關聯產品)
溶壁酶(破壁酶)干粉
蝸牛酶干粉
消解酶(溶細胞酶)干粉
真菌DNAout
柱式真菌DNAout
細胞器DNA提取
絲狀真菌線粒體DNAout
線狀DNA清除劑
柱式動物線粒體DNAout,PCR級
柱式動物線粒體DNAout,測序級
柱式昆蟲mtDNAout,測序級(停產)
柱式血液mtDNAout,測序級(見關聯產品)
柱式植物mtDNAout,測序級(見關聯產品)
柱式植物葉綠體DNAout
細菌DNA提取
Southern級細菌(G+)DNAout(見關聯產品)
Southern級細菌(G-)DNAout(見關聯產品)
百萬堿基級細菌(G+)DNAout(見關聯產品)
百萬堿基級細菌(G-)DNAout(見關聯產品)
大提柱式土壤DNAout
大提柱式細菌DNAout
測定步驟:
1、 酶標儀預熱30min以上,調節波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。