培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:BRD4抑制劑(ARV-825)
英文名稱:ARV-825
產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10517
產品介紹:
英文名稱:ARV-825 產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg ARV-825是一種PROTAC類的BRD4抑制劑。ARV-825對BRD4的BD1和BD2結構域具有高親和力,Kds值分別為90和28nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:1818885-28-7 純度:99.35% 分子式:C??H??ClN?O?S 分子量:923.43 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
茶樹菇轉錄因子Tbx3抗體Anti-IFNG Antibody透明質合3(HAS3)
斑玉蕈tinagl1抗體Anti-IFNG Antibody透明質合2(HAS2)
三線鐮刀菌辣椒受體5抗體Anti-IFNG Antibody透明質合1(HAS1)
糊精乳桿菌腫瘤排斥抗原gp96 1 變異體抗體Anti-IFNG Antibody透明質基葡糖4(HYAL4)
野生金針菇(白色)組織因子途徑抑制劑抗體Anti-IFNG/IFN-γ Antibody透明質基葡糖3(HYAL3)
中華根瘤菌星形瘤高表達蛋白抗體(環指蛋白100)Anti-IFNGR1 Antibody透明質基葡糖2(HYAL2)
根瘤菌微管蛋白β5抗體Anti-IFT88 Antibody透明質基葡糖1(HYAL1)
黑曲霉轉錄中介因子Tif1α抗體Anti-IFNGR2 Antibody頭蛋白(NOG)
大腸埃希菌轉錄中介因子Tif1β抗體Anti-IFNGR1 Antibody戊二脫氫(OGDH)
威林格氏線黑粉菌磷化轉錄中介因子Tif1β抗體Anti-IGF1 Antibody戊二受體1(OXGR1)
釀酒酵母非受體酪蛋白激2抗體Anti-IGF1R Antibody銅轉運蛋白2(COPT2)
串珠鐮刀菌*轉錄中介因子Tif1γ抗體Anti-IGF1R Antibody銅轉運蛋白1(COPT1)
毛殼調節染色體組裝激1抗體Anti-IGF1 Antibody銅離子轉運ATPβ肽(ATP7β)
莖點霉屬翻譯控制腫瘤蛋白抗體Anti-IGF2(IGF-2) Antibody銅藍蛋白(CP)
漸綠木霉腫瘤/抗原20抗體Anti-IGF2-AS Antibody銅伴侶超氧化物歧化(SOD4)
棒狀桿菌屬線粒體內膜轉位抗體Anti-IGF2R Antibody同種異體移植炎癥因子1(AIF1)
5-羥色胺受體5A抗體豬霍亂沙門氏菌小鼠小腸平滑肌細胞
5-羥色胺受體7抗體立枯絲核菌(斜面)小鼠結腸平滑肌細胞
5-羥色胺受體6抗體分枝桿菌屬小鼠食管上皮細胞
ATP依賴解旋SMARCA2抗體動物雙歧桿菌乳亞種小鼠小腸粘膜上皮細胞
BRD4抑制劑(ARV-825)大腸埃希 Fmoc-D-4-苯鉤端螺旋體IgM抗體
Acinetobacter bereziniae Nemec et al. (S,S)-DACH-萘基 Trost 配體柯薩奇病A16IgG抗體
黑木耳 硫化鈣胰島原
釀酒酵母 2-溴-5-(三氟甲氧基)糖化血紅蛋白A1c
近綠曲霉 雙(二苯基膦苯基)二化鈀(II)糖化蛋白
青色鏈霉 乙酰丁酯血糖
香菇 2-異丁脊髓灰質炎病IgG抗體
耐冷冷桿 蘇丹橙G肌鈣蛋白I
扣囊復膜孢酵母 正已酐補體蛋白5
淡紫擬青霉 十氫喹啉(順式+反式)2,5寡腺合成
牛奶類芽胞桿 十聯苯2,5寡腺合成1
藍色小單孢 3-氨基-4-吡啶1,25-二羥基維生D3
灰樹花 2,2-二羥基偶氮苯角蛋白18
側耳木霉 二異基磷化氫α平滑肌肌動蛋白
梨形毛霉 Fmoc-Lys(Ddiv)-OH甲狀腺結合球蛋白β
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)