PCR的反應(yīng)條件：
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
?
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：GOX基因核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T   0.1PCR管
產(chǎn)品貨號：FS-P10713
產(chǎn)品分類：熒光探針法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
鼠李糖短狀桿菌潛在石油烴類降解菌/生物活性物質(zhì)篩選模式菌株: no水樣/近海海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃

小單孢菌屬抑制彈性蛋白酶的活力模式菌株: no海底土提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C

青霉屬活性物質(zhì)；抗凝血模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0018生長條件: 28C

大腸埃希菌研究模式菌株: no病料提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37

膜蹼畢赤酵母生長條件: 25-30℃培養(yǎng)基: 13溫泉泥提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no 真空冷凍干燥法

 F521用酒類和食品顏色（桔紅）。模式菌株: no種屬: Monascus│anka提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0013生長條件: 30℃

 -1463℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

茄鏈格孢（番茄早疫病菌）教學(xué)科研模式菌株: no形態(tài): 菌絲體全部埋生或部分表身生。菌絲無色至褐色。很少形成子座，無剛毛及附屬枝。分生孢子梗淡褐色至褐色，單枝或不規(guī)則分枝，短或長，彎曲或呈屈膝狀。產(chǎn)孢孔出式產(chǎn)孢，合軸式延伸或不再延伸，孢痕明顯。分生孢子呈鏈狀或單生，淡褐色至深褐色，形狀不一，表面光滑或具微刺，有縱橫隔膜，頂端常具喙。菌絲有隔膜和分枝，較老的顏色較深。分生孢子梗直立或稍彎曲，色深而短，單生或叢生，有1-7個隔膜，大小為50-90um ×6-9um.分生孢子自分生抱子梗頂端產(chǎn)生，通常單生，其形狀差異很大，倒棍棒形至長橢圓形，顏色為淡金黃色至欖褐色，具長嚎，表面光滑，9-11個橫隔膜，0到數(shù)個縱隔膜，大小為117-154um ×9.8-15.7um,嚎長等于或長于孢身，有時有分枝，嚎寬2. 5-5um。番茄葉片安全等級: 1培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃

 AS4.68培養(yǎng)基: 14模式菌株: no種屬: Streptomyces│globisporus var.flavus提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法

黑曲霉培養(yǎng)基: CM0015糖化酶菌。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 定期移植法；其他

黃色短桿菌培養(yǎng)基: CM0048L-纈氨提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 32℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

野野村氏菌屬菌種抗大腸桿菌模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C

 1(1),9,12　a　1,5模式菌株: no種屬: Salmonella│sendai提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃

 -1464℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

馬流產(chǎn)沙門氏菌科研及血清定型模式菌株: no公馬死后膿汁提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37

沙福芽孢桿菌培養(yǎng)基: 821潛在的有機污染物降解菌/分離自石油富集菌群沉積物/TVMC沉積物/TVMC沉積物/TVMC沉積物(31-35cm)提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

柴胡皂苷BPP-1  蛋白磷酯酶-1（抗原） 粒-巨噬克隆刺激因子IgG

橙皮素BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A)  骨成型蛋白受體1A抗原 綠色熒光蛋白IgG

穿心蓮內(nèi)酯PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor)  D型-過氧化酶活化增生受體(多肽） 綠色熒光蛋白IgG

甘草PP-2A (protein phosphatase 2A)  蛋白質(zhì)磷酶-2A（抗原） 兔抗綠色熒光蛋白IgG

甘草次BOb-1(B-cell oct-binding protein 1)  B特異性轉(zhuǎn)錄因子抗原 生物素化兔抗人纖維蛋白原

甘草單銨鹽;甘草銨PP-2B alpha 1   蛋白磷酯酶-2B 催化亞單位（抗原） GDNF家族受體α-1IgG

標(biāo)準(zhǔn)品PR (Progestogerone receptor)  孕激素受體（抗原）抗體

甘草苷PS-1(NT)，Presennillin-1(S182)  早老素蛋白-1（抗原） GDNF家族受體α-4IgG

異甘草苷PS-1，Presennillin-1(CT)  早老素蛋白-1（S182） 生物素標(biāo)記兔抗三聚胺IgG

甘草素/甘草BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(mouse rat)  乳腺癌易感基因1抗原(小鼠 大鼠) 生長激素受體IgG
GOX基因核酸檢測試劑盒Cefoxitinsodium　頭孢西丁鈉　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

Cefoxitinsodium　頭孢西丁鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

Valsartan　纈沙坦　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

Valsartan　纈沙坦（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

Glipizide　格列吡嗪　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

Glipizide　格列吡嗪（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

DonepezilHCl　鹽多奈哌齊I型　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

Estrone　雌酚/雌　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

Estrone　雌酚/雌（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

ClindamycinHCl　鹽克林霉素　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

ClindamycinHCl　鹽克林霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

VerapamilHCl　鹽維拉帕米　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

VerapamilHCl　鹽維拉帕米（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

Mycophenolicacid　霉酚;麥考酚;MPA　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

Mycophenolicacid　霉酚;麥考酚（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)