參數規格:
產品名稱:CTP2-CP4-EPSPS基因核酸檢測試劑盒
產品規格:48T 0.1PCR管
產品貨號:FS-P10723
產品分類:熒光探針法
產品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產品特點:
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
ATCC19897=CBS483.68=CCRC11466=DSM40147=IFO12模式菌株模式菌株: yes種屬: Streptomyces│cremeus提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 0329生長條件: 28℃
-1492℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
裂褐層孔菌培養基: 14模式菌株: no子實體提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 25 定期移植法
刺孢殼培養基: 14煙草發酵煙草提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法;定期移植法
泡盛曲霉培養基: CM0015以淀粉為原料發酵檸檬。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法
河豚素假交替單胞菌培養基: 471微生物/耐冷菌;產酶微生物/產蛋白酶、酯酶水樣/海冰提供形式: 斜面培養物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
依氏假交替單胞菌生物轉化微生物/固氮菌模式菌株: no沉積物/表層沉積物提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: 471生長條件: 28℃
熱帶假絲酵母近海酵母模式菌株: no沉積樣/秋茄根底泥提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: 513生長條件: 28℃
-1493℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
大腸埃希氏菌培養基: 0033遺傳研究提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
紅色鏈霉菌生長條件: 28C培養基: CM0039提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥
鏈格孢培養基: 14模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 25 定期移植法
乳乳球菌研究分析模式菌株: no乳汁提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 55生長條件: 37
ATCC491=BCRC14868=CCUG24088=CIP102089=DSM20107=KCTC1441=LMG16327=NBRC3747=NRRLB-404模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Cellulomonas│udaCompost提供形式: 凍干物模式菌株培養基: 7
炭疽芽胞桿菌培養基: CM0116研究提供形式: 其他安全等級: 3模式菌株: no生長條件: 37℃ 真空冷凍干燥法
-1494℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
植CDK6 (Cyclin Dependent Kinase 6) 周期素依賴性激酶6抗原VTG 魚、青鳉魚卵黃蛋白原抗體
龍膽苦苷CDK7/Cyclin H/MAT1 周期素依賴性激酶7抗原VSV-G tag VSV-G tag標簽抗體
膽CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8) 周期素依賴性激酶8抗原VSIG4 T淋巴負調節蛋白抗體
豬去氧膽Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C) 周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗原VRK1 牛痘病相關激酶1抗體(絲氨/蘇氨蛋白激酶VRK1)
去氧膽CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 ) 軟骨糖蛋白39(多肽)VPS4a 液泡分選蛋白4抗體
芝麻素CEA(Carcinoembryonic Antigen )peptide 人癌胚抗原抗原VPS18 空泡分選蛋白18抗體
芝麻林素Cecropin 抗菌肽/天蠶素(多肽)VP2 重組豬細小病VP2蛋白抗體
標準品HER2 receptor(erbB-2 isoform 2) c-erbB-2受體抗原VNN1 血管非炎癥分子1抗體
左旋多巴ErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3) 表皮生長因子受體3(抗原)VMAT2 腦單胺類神經遞質轉運蛋白抗體
紫杉C-erbB-4/HER4/erbB-4 (epidermal growth factor receptor4) c-erbB-4癌基因抗原VMAT1/VAT1 嗜鉻顆粒胺轉運蛋白VAT1抗體
CTP2-CP4-EPSPS基因核酸檢測試劑盒Epinastine HCl 鹽依匹斯汀 質量規格:>97%
Epinastine HCl 鹽依匹斯汀(標準品) 質量規格:>97%
Eplerenone 依普利 質量規格:>97%
Eplerenone 依普利(標準品) 質量規格:>97%
Etodolac 度 質量規格:>97%
Etodolac 度(標準品) 質量規格:>97%
Etonogestrel 孕烯 質量規格:>97%
Everolimus;RAD001 依維莫司 質量規格:>97%
FluocinoloneAcetonide 醋氟輕松;醋膚輕松 質量規格:>97%
FluocinoloneAcetonide 醋氟輕松;醋膚輕松(標準品) 質量規格:>97%
Flupirtinemaleate 馬來氟吡汀 質量規格:>97%
Flupirtinemaleate 馬來氟吡汀(標準品) 質量規格:>97%
Fulvestrant 氟維司群 質量規格:>97%
Gestodene 孕二烯 質量規格:>97%
Gestodene 孕二烯(標準品) 質量規格:>97%
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。
如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。