問:常用的DNA 濃度及純度檢測方法有哪些?
DNA 上樣液 ( 藍 ),6×( 非甘油 )10mL說明書稱答:回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過對比定量的Marker 來定量濃度;紫外分光檢測OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會偏低,因為pH 值和離子存在會影響光吸收值,但不表示純度低。
問:長片段回收時應注意哪些問題?
答:DNA 上樣液 ( 藍 ),6×( 非甘油 )10mL說明書當DNA 段長度較長(5 kb 以上)時,回收效率會有所下降,這是DNA 切膠回收時的常見現象。此時建議按以下方法解決問題:
1 適當增加待回收DNA 樣品的點樣量;
2 由于長段DNA 不易從樹脂上洗脫下來,建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過程中對長段DNA 的物理損傷,如混合振蕩操作不要過于劇烈,切膠時不要將DNA 長時間暴露在紫外等下。
DNA 上樣液 ( 藍 ),6×( 非甘油 )10mL說明書的詳細介紹:
DNA提取流程圖:公司DNA 上樣液 ( 藍 ),6×( 非甘油 )10mL說明書的RNA/DNA提取目錄有下面10個系列,5000余種產品:點擊了解更核酸電泳及回收。
1、RNA純化系列產品
2、DNA純化系列產品
3、電泳及回收系列產品
4、探針標記及檢測系列產品
5、核酸擴增系列產品
6、克隆表達系列產品
7、基因組研究系列產品
8、蛋白質研究系列產品
9、細胞生物學研究系列產品
10、即用型溶液、質粒庫、菌種庫等等
實驗步驟:
(1)DNA 上樣液 ( 藍 ),6×( 非甘油 )10mL說明書實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
注意事項:
● DNA 上樣液 ( 藍 ),6×( 非甘油 )10mL說明書溶液PE *次使用前請按瓶上標簽加入4 倍體積的無水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產品對電泳使用的Agarose 種類沒有嚴格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒有必要一定要使用低熔點的Agarose 等。
● 電泳時請使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請適當延長電泳時間,在條帶分離清晰后進行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時應盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應等,不會影響后續試驗。
● 為了保證回收效率,請不要使用未調整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請嚴格按照操作步驟操作。
異牡荊素(標準品) Isovitexin 29702-25-8,38953-85-4 質量規格:HPLC≥98%,標準品
異氯磷(標準品) Dicapthon 2463-84-5 質量規格:分析標準品
異綠原酸C(標準品) Isochlorogenic acid C 32451-88-0 質量規格:HPLC≥98%,標準品
異綠原酸B(標準品) Isochlorogenic acid B 14534-61-3 質量規格:HPLC≥98%,標準品
異綠原酸A(標準品) Isochlorogenic acid A 2450-53-5 質量規格:HPLC≥98%,標準品
異羅漢果皂苷 V isomogroside V 1126032-65-2 質量規格:HPLC≥98%,標準品
異魯米諾(>98.0%(HPLC)(T)) Isoluminol 3682-14-2 質量規格:>98.0%(HPLC)(T)
異蓮心堿(標準品) Isoliensinine 6817-41-0 質量規格:HPLC≥98%,標準品
異類葉升麻苷;異毛蕊花糖苷(標準品) Isoacteoside 61303-13-7 質量規格:HPLC≥98%,標準品
異菌脲標準溶液(100μg/ml,u=4%) [3-(3,5-Dichlorophenyl)-2,4-dioxoimidazolidinyl]-N-(methylethyl)carboxamide standard solution 36734-19-7 質量規格:100μg/ml,u=4%
異吉非羅齊(吉非羅齊雜質) iso-Gemfibrozil (Gemfibrozil Impurity) 86837-66-3 質量規格:美國進口
異茴芹內酯 Isopimpinellin 482-27-9 質量規格:HPLC≥98%,標準品
異環磷酰胺(標準品) Ifosfamide 3778-73-2 質量規格:HPLC>98%,標準品
異環磷酰胺 Ifosfamide 3778-73-2 質量規格:>99%,USP,BR,可用于細胞培養
異槲皮苷(標準品) Isoquercitrin 482-35-9 質量規格:HPLC≥98%,標準品
異葒草苷(標準品) luteolin-6-C-glucoside 4261-42-1 質量規格:HPLC≥98%,標準品
異鉤藤堿(標準品) Isorhynchophylline 1811243 質量規格:HPLC≥98%,標準品
異甘草素(標準品) Isoliquiritigenin 961-29-5 質量規格:HPLC≥98%,標準品
異甘草素 Isoliquiritigenin 961-29-5 質量規格:≥98%,甘草提取
DNA 上樣液 ( 藍 ),6×( 非甘油 )10mL說明書Lappaconitine規格:滴定法≥98%,標準品
Lapatinibbase規格:>98.5%,可用于細胞培養
Lapachol規格:>98%,進口標準品
Lanthanum(III)oxide規格:>99%,EP
Lanthanum(III)chloride,hexahydrate規格:>99%,BR
Lanthanum(III)acetate,pentahydrate規格:>99%,BR
LansoprazoleSulfone規格:美國進口
Lansoprazole規格:干品含量>98%,USP32
Lansoprazole規格:HPLC>98%,標準品
Lamotrigine-13C3規格:美國進口