小鼠成纖維細胞生長因子-1ELISA試劑盒*

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中大鼠活化蛋白C（APC）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

小鼠成纖維細胞生長因子-1ELISA試劑盒*采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠活化蛋白C（APC）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠活化蛋白C（APC）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

 1.  血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將*碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。*在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

小鼠成纖維細胞生長因子-1（FGF-1）ELISA試劑盒在操作中應注意以下5個方面。

1．隨著病情的進展或由其他因素影響，某些抗體在機體內的含量發生大幅波動，因此有必要對標本進行預處理，例如對血清標本作適當稀釋，或離心分離血脂等。間接法測定中，標本適當稀釋還可降低非特異性反應。
2．加樣一般使用加液器，在ELISA中一般有4次加樣：加標本、加酶結合物、加底物和加終止液。加標本時必須每份標本使用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶結合物、底物和終止液時則不需更換吸嘴。
3．在成批手工檢測中，還應注意操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原抗體反應和酶促反應時間不*，對競爭法及定量檢測影響很大，不注意可能會導致錯誤結果或定量不準。
4．洗滌是ELISA操作過程中決定實驗成敗的一個關鍵步驟。目的是除去未結合的免疫反應物，終止抗原抗體反應，除去標本中與反應無關的成分、游離的酶標物以及反應過程中吸附于固相載體上的非特異性物質。可用洗板機洗板或手工洗板，前者洗滌質量較好，各反應孔洗滌效果均一，批內、批間差異小，手工洗板應注意控制各孔洗滌效果，差異不宜太大。
5．準確判定結果須使用ELISA測讀儀（酶標儀），比色法判讀可選擇單波長或雙波長，根據反應液顏色的不同選用不同波長的濾光片，以空白孔校零測定反應孔的吸光度值（A值）。酶標儀具有良好的重復性。   

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