細胞培養用品消毒滅菌的方法與注意事項！

細胞培養用品消毒滅菌的方法與注意事項！

每次做完實驗，細胞培養用品也都清洗了，為什么細胞的又污染了？原因在這：細胞培養用品清洗完還需要消毒滅菌哦！操作方法如下：

一、濕熱消毒

⒈濕熱消毒的要求

使用壓力蒸汽滅菌器進行濕熱消毒。

①消毒物品不能裝得太滿，物品之間應留有空隙，以利于消毒器內蒸汽的流動。

②排氣管要插入消毒器的槽內。若排氣管斷裂，要將排氣管與排氣閥調至同一位置。

③玻璃器材使用端(管口、瓶口)要向下放置。

④液體消毒時，用棉塞或插有針頭的膠塞封瓶口。

⑤加熱前將放氣閥摘子置垂直位(開放)，消毒器內空氣隨溫度升高由此閥孔逸出，容器內冷空氣隨之排出。當水煮沸時，有一股較急的蒸汽沖出時，將放氣閥摘子置水平位(關閉)。排除冷空氣的另一種方法是：放氣閥摘子置水平位(關閉)，加熱，壓力升至5磅時，將摘子置垂直位(開放)，冷、熱空氣先后排出(可用手試)。待壓力指針回歸零位時，放氣閥摘子再置水平位(關閉)。

⑥繼續加熱，當消毒器內升壓至需要壓力時，計時并使壓力恒定。壓力維持方法：用電加熱時，可通過電源和滅菌器間的穩壓器調節；沒有穩壓器時，用放氣閥摘子自動排氣調節；用煤氣加熱時，可調節火力維持壓力。根據消毒物品種類不同所選擇的消毒壓力和時間也不同，一般物品(如布類、金屬器械、玻璃器皿等)消毒的要求是15磅20分鐘；橡膠制品為10磅10分鐘；常規液體消毒15磅15分鐘。一般認為在這種壓力下1分鐘內幾乎可殺死所有微生物，但由于消毒物品的包裝內仍可能留有冷空氣，而使高壓蒸汽不能達到消毒器的各部分，所以要延長消毒時間。

⑦消毒完畢，待壓力指針降至零位，再等數分鐘，待放氣閥摘子放完氣后打開消毒器蓋。液體瓶口棉塞換膠皮塞或拔去膠皮塞針頭換新塞。

⒉濕熱消毒的注意事項

①不可用安全閥摘子排氣。

②消毒的過程中若出現漏氣現象，可調節消毒器蓋內的膠墊的位置。

③滅菌完畢，不要急于取出消dupin，可利用消毒器的余熱去除物品部分濕氣，待半小時左右再移入干燥箱烘干。

二、干熱消毒

這種消毒方法主要用于玻璃器皿消毒，一般溫度在160℃維持90—120分鐘就可以殺死芽胞，達到消滅包括細菌、芽孢在內的一切微生物的目的，還可破壞熱原質。消毒完畢，待烘箱內溫度冷卻后再開門，避免因冷空氣突然進入，烘箱內溫度驟降引起玻璃器皿損壞。

三、紫外線消毒

紫外線直接照射消毒是各實驗室常用的方法，主要用于培養室空氣、操作臺、塑料培養皿和培養板等表面消毒。進行室內消毒時，紫外線燈應距地面2．5米，使各處有0．06微瓦能量的照射。當室內有塵土時，殺菌能力減弱，故其消毒環境應清潔無塵，并要求消毒空氣濕度小于50％，才能達到殺菌效果。紫外線消毒時產生臭氧，對身體有害，故紫外線消毒停止后30分鐘才可入室工作。目前有的實驗室采用電子滅菌燈代替紫外燈進行空氣消毒。

四、濾過消毒

大多數培養用液，如人工合成培養基、血清、酶液等均采用濾過法除菌。常用的除菌濾器有正壓式和負壓式兩種。

⒈正壓式(加壓式)濾過消毒

正壓式除菌濾器為金屬結構，中間墊一種特制的混合纖維素酯微孔濾膜，其過濾速度較快，效果較好，被多數實驗室采用。濾膜孔徑有0．6微米、0．45微米、0．22微米三種規格。濾過除菌時，常使用0．22微米孔徑的濾膜。濾器上下層各有一槽，放置硅膠墊圈，將濾膜壓緊固定。

濾膜使用時應注意：

①濾膜薄且光滑，容易移動，安裝時膜位置一定要放正。過分干燥的濾膜很脆，在高壓或高溫干燥時易破裂，因此安裝前可先用三蒸水潤濕濾膜。

②為保證過濾效果，在使用時，每次墊兩張濾膜，上面一張孔徑為0．45微米，下面一張孔徑為0．22微米，或兩張均為0．22微米。

③使用無齒玻片鑷子夾取濾膜，以防止鑷齒弄破濾膜。

④加大壓力時用力應均勻，用后打開濾器對光檢查濾膜是否移動和有無破裂。

⑤濾器濕熱消毒，37℃干燥。濾膜用后丟棄。若過濾少量液體，可將小型針頭濾器安裝在注射器上使用。目前許多廠家有一次性針頭濾器出售。國產針頭濾器易污染。

⑥不同廠家的濾膜質量有差異。

⒉負壓式濾過消毒

負壓式濾過消毒常使用玻璃濾器。玻璃濾器以燒結玻璃濾板固定在一玻璃漏斗上做成，適于各種培養液的濾過除菌，但不宜濾過血清等粘稠液體，因為容易堵塞濾板孔。根據濾板孔徑大小分為G0—G6幾種規格，一般使用G6型(孔徑為0．22微米)除菌。玻璃濾器漏斗接抽濾瓶，膠管連接抽濾瓶和抽氣瓶，抽氣瓶再與真空抽氣泵相連，或 抽濾瓶用膠管與玻璃水泵相連。負壓式濾過消毒的缺點是濾速較慢，清洗過程繁瑣。

負壓式除菌濾器安裝使用注意事項：

①漏斗與抽濾瓶連接部位要旋緊，并用消毒布包緊連接部位，以保證瓶口不漏氣。

②當抽濾瓶內有負壓形成時，先夾緊抽濾瓶下口與抽氣瓶連接的膠管，再緩慢停止抽氣，防止有菌空氣倒回，污染濾液。自然濾過一段時間，待流速減慢可再行抽氣。

③當漏斗中剩余液體為50～100毫升時，夾緊下口膠管停止抽氣，空氣隨液體自然濾過消毒進入瓶內，瓶內壓力升高，真空解除。

④拆除真空泵和抽氣瓶連接裝置，拆除漏斗與抽濾瓶連接部包布。

⑤漏斗與抽濾瓶連接部位在火焰前方均勻燒灼后，兩者分開，抽濾瓶斜放在超凈臺上，瓶口順風向。

五、消毒劑

75％酒精、新潔爾滅、過氧乙酸、乳酸和洗必泰等都是常用的有效消毒劑。0．5％的過氧乙酸在10分鐘內可將芽孢菌和各種病毒殺死；乳酸蒸汽常用做無菌室內或周圍環境的定期消毒；75％酒精常用于超凈臺的臺面、器械、實驗操作者的皮膚等的消毒，0．1％新潔爾滅用于對桌、椅、地面、皮膚、操作臺面進行擦拭或浸泡消毒；0．1％洗必泰水溶液用于皮膚浸泡消毒。

六、塑料器皿消毒

塑料器皿不耐高溫，清洗干凈后用75％酒精(分析純)浸泡過夜，滅菌三蒸水浸泡兩次，每次10分鐘，紫外線照射1小時，再經細胞基礎營養液浸泡過渡后，供短期內使用。

七、電離輻射消毒

大包裝塑料器皿或不能用上述方法消毒的試劑，可用電離輻射消毒。電離輻射消毒方式有兩種：一種是用2．5百萬拉德60Co產生的γ射線照射48～72小時；另一種是用大于5百萬電子伏特的高能電子束照射。前者穿透能力強，處理效果可靠，后者適于較小物品的滅菌。消毒時由輻照中心專業人員操作。

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