LB培養基的使用原理與配制方法！

LB培養基的使用原理與配制方法！

培養基（Medium）是供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養料。那么LB培養基是什么培養基？LB一般被解釋為Luria-Bertani，然而根據其發明人貝爾塔尼(Giuseppe Bertani)的說法，這個名字來源于英語lysogeny broth，即溶菌肉湯。LB培養基是近年來用于培養基因工程受體菌(大腸桿菌)的常用培養基之一。

LB培養基是一種培養基的名稱，是微生物學實驗中用的培養基，生化分子實驗中一般用該培養基來預培養菌種,使菌種成倍擴增,達到使用要求.可分為液體培養基和固體培養基。

LB培養基是一種應用泛和普通的細菌基礎培養基，有時又稱普通培養基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。

酵母提取物：酵母經破壁后將其中蛋白質、核酸、維生素等抽提，再經生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、維生素等天然活性成分的淡黃色粉末，其中氨基酸含量30%以上，總蛋白50%以上，核苷酸10%以上，廣泛用作生物培養基和食品調味品制造原料。

胰化蛋白胨：一種優質蛋白胨，是以新鮮牛肉和牛骨經*消化，濃縮干燥而成的白色粉末，含有豐富的氮源、氨基酸等。

酵母提取物為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽、生長因子、維生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生長環境(如滲透壓)，其次是提供無機鹽。

在配制固體培養基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下96℃時溶化，一般實際應用時在沸水浴中或墊以石棉網直接煮沸溶化。瓊脂在40℃時凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養基中瓊脂的含量根據瓊脂的質量和氣溫的不同而有所不同。

由于這種培養基多用于培養細菌，因此，要用稀酸或稀堿將其pH調至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖。

LB培養基用途

用于一般細菌培養，特別用于分子生物學試驗中大腸桿菌的保存和培養。

LB培養基使用原理

蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、維生素和生長因子;維持均衡的滲透壓;葡萄糖提供碳源;瓊脂是培養基的凝固劑。

LB培養基配制方法

配制每升培養基，應該在950 ml去液態lb培養基離子水中加入：胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 搖動容器直至溶質溶解。用5mol/LNaOH調pH至7.0。用去離子水定容至1L。在15psi高壓下蒸汽滅菌20min。

LB固體培養基1L和液體一樣，加15g瓊脂粉，一定要在溫度降下之前加好抗固態LB培養基生素，并且倒好板。

LB固體培養基倒板

⒈配制：100ml LB培養基加入1.5g瓊脂粉。

⒉抗生素的加入：高壓滅菌后，將融化的LB固體培養基置與55℃的水浴中，待培養基溫度降到55℃時(手可觸摸)加入抗生素，以免溫度過高導致抗生素失效，并充分搖勻。

⒊倒板：一般10ml倒1個板子。培養基倒入培養皿后，打開蓋子，在紫外下照10-15分鐘。

⒋保存：用封口膠封邊，并倒置放于4℃保存，一個月內使用。 配400ml的話成分按比例減少就行了，pH還是要按規定的。

LB培養基設計不同的離子對大腸桿菌生長狀況的影響

以下方法僅供參考：

⒈首先養幾個平板固體培養基培養的大腸桿菌，保證這些細菌來自于同一個克隆;

⒉采用液體培養并用分光光度計測定濁度來評價大腸桿菌生長。

⒊鹽可選擇氯化鎂、氯化鋅、銨鹽、磷酸鹽等;

⒋濃度差別可做，可不做;

⒌因為分光光度計的準確性有一定要求，培養時間就不能太長，多8小時;

根據這些條件設計實驗就容易了。大體上是，先配制好各種液體培養基;然后從1中挑一個菌落放到一個起始的基本LB液體培養基，培養到稍微有點渾時，就可以向各種培養基中加同樣體積的細菌;后就是測定OD值了。記得每個培養基做3個重復管。

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