分光光度計的原理是由一光源產生的連續輻射光經色散系統(單色器)分解成波長連續的單色光,單色光通過照射到樣品池上,經過池中樣品時會產生吸收,通過檢測出射光的強度S和入射光的強度R,透射率T=S/R。如果連續調整波長(即掃描),就可以得到在生化樣品關于波長分布的透射率,其透射率關于波長的分布和樣品的成分和濃度相關。從而判斷樣品的成分,濃度。
分光光度儀通常用作物質鑒定、純度檢查,有機分子結構的研究。在定量方面,可測定結構比較復雜的化合物和混合物中各組分的含量,也可以測定物質的離解常數,絡合物的穩定常數,物質分子量鑒別和微量滴定中指示終點以及在高效液相色譜中作檢測器等。