產(chǎn)品名稱 | 原代人外周血單核細胞 | 英文名稱 | Human Peripheral Blood Monocyte Cells |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 貨號 | GOY-01X1231 |
組織來源 | 外周血 | 細胞形態(tài) | 圓形、巨噬細胞樣 |
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 半貼壁半懸浮
細胞形態(tài) 圓形、巨噬細胞樣
傳代特性 不增殖;不傳代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞簡介:
人外周血單核分離自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。單核細胞起源于骨髓中的造血干細胞,并在骨髓中發(fā)育。當它們從骨髓進入血液時仍然是尚未成熟的細胞。與其他血細胞比較,單核細胞內(nèi)含有更多的非特異性脂酶,并且具有更強的吞噬作用。單核細胞在血液中停留2-3天后遷移到周圍組織中,細胞體積繼續(xù)增大,直徑可達50-80μm,細胞內(nèi)所含的溶酶體顆粒和線粒體的數(shù)目也增多,成為成熟的細胞。固定在組織中的單核細胞稱為組織巨噬細胞,它們經(jīng)常大量存在于淋巴結(jié)、肺泡壁、骨髓、肝和脾等器官。激活了的單核細胞和組織巨噬細胞能生成并釋放多種細胞毒、干擾素和白細胞介素,參與機體防衛(wèi)機制,還產(chǎn)生一些能促進內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞生長的因子。在炎癥周圍單核細胞能進行細胞分裂,并包圍異物。
方法簡介:
公司實驗室分離的人外周血單核采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的人外周血單核經(jīng)CD14免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、您收到細胞后,請按照以下方法進行操作:
取出T-25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時或過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。
2、細胞傳代:
1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1500rpm/min,離心5min;
3)棄上清,沉淀細胞用12ml培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細胞貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存:
1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后輕輕吹打細胞使之脫落,再加入培養(yǎng)液終止消化,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1500rpm/min,離心5min;
3)用適當量的凍存液(基礎(chǔ)培養(yǎng)基:FBS:DMSO=7:2:1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。
4、細胞復蘇:
1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具), 快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細胞移至15ml無菌離心管中,滴加入培養(yǎng)液5ml混勻細胞,然后將細胞懸液轉(zhuǎn)移至適當面積大小的培養(yǎng)皿中;
3)放置于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
615小鼠乳腺癌瘤株;Ca763 | 615小鼠肺癌瘤株;HP615 |
615小鼠乳腺癌瘤株;Ca761 | 豬藍耳病毒天津株(TJM-F92)疫苗PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
615小鼠T細胞性白血病瘤株;L7912 | 貓皰疹病毒(FHV)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
615小鼠乳頭狀肺腺癌瘤株;P615 | 犬細小病毒(CPV)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
小鼠肝癌瘤株;H22 | 牛棒桿菌PCR試劑盒 |
615小鼠前胃癌瘤株;Fc | 鸚鵡熱衣原體(CP)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
KM小鼠子宮頸癌瘤株;U14 | 羅湖病毒(TiLV)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
大鼠前列腺成纖維細胞 | 牛細小病毒(BPV)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
C57小鼠黑色瘤瘤株;ME(Me) | 羊源性成分PCR試劑盒 |
Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256 | 乙型肝炎病毒cccDNA PCR試劑盒 |
KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細胞瘤瘤株;G422 | 鼻疽伯克霍爾德菌(BM)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
KM小鼠網(wǎng)織細胞肉瘤瘤株;LⅡ | 豬藍耳病病毒通用型(PRRSV-U)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
T739小鼠肺腺癌瘤株;LA795 | 原代人外周血單核細胞豬鏈球菌通用型(SS-U)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
615小鼠網(wǎng)織細胞性白血病瘤株;L615 | 貓杯狀病毒(FCV)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
埃可病毒 30 型檢測試劑盒 | 豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-U)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中,移入生物安全柜,
2) 從胸部解剖乳鼠,取出雙肺置于預冷的PBS中,盡可能的除去結(jié)締組織等,
3) 取肺邊緣部分,剪碎,將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中,倒置于細胞培養(yǎng)箱中,
4) 2h后,培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基,小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱,確保組織塊不會飄起來,
5) 每3d換液2mL,待細胞從組織塊中爬出來后,隔2d換液,待細胞融合達到60-70%左右時,去除組織塊,將肺微血管內(nèi)皮細胞重新鋪瓶。