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elisa檢測試劑盒原理的程序

時間:2020/10/14閱讀:314
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elisa檢測試劑盒原理:

    采用競爭法測定金黃地鼠氧化elisa檢測試劑盒水平。用金黃地鼠氧化抗原包被微孔板,制成固相載體,實驗時依次在微孔板中加入標本及標準品,并加入HRP標記的OXLDL抗體,標本及標準品中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。反復洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化為藍色,再用硫酸終止反應,轉變成黃色。標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,顏色越淺。顏色的深淺和樣品中的OXLDL含量呈負相關。采用酶標儀在450nm波長測定吸光度(OD值),根據標準曲線,計算測試樣品中OXLDL濃度。

elisa檢測試劑盒操作程序:

1. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。

2. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。。

3. 取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

4.測定:以空白孔調零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

5.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據elisa檢測試劑盒樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。

elisa檢測試劑盒試劑盒性能:

1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。

2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于(參考說明書)

3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4. 重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

6. 有效期:6個月。 

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