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RNA直接法提取具體操作過程

時間:2024/9/9閱讀:305
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1)加入1ml Trizol試劑,混勻,冰上孵育10min。

2)4℃,12000rpm離心10min,小心轉移上清液到不含顆粒的新EP管中。

3)加入200ul氯仿,劇烈振蕩15秒,室溫孵育5min。

4)4℃,12000rpm離心15min。混合液分三層,包括最下面的C6H5OH - 氯仿有機相,中間相和上層水相。小心轉移上層水相到新的EP管(大約60%體積的Trizol),不要吸取中間相,可留下少量上層液體!(Note:質量比數量更重要!)

5)加入等體積的異丙醇,輕輕地顛倒混勻約10次,室溫放置10min。

6)4℃,12000rpm離心10min。棄上清,1ml 75%乙醇洗滌RNA沉淀兩次。

7)4℃,12000rpm離心5min,棄上清,室溫下風干5-10min(不要太干,過度干燥會導致RNA難溶解!)。將RNA溶于15μl-50μlDEPC水中。

8)立即進行反轉錄反應,或先-80℃長期保存。


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