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磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶測試盒50管/48樣

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所  在  地上海市

更新時間:2022-04-14 12:18:13瀏覽次數:226次

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貨號 BJ-01S9797
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產品屬性:  

產品名稱

檢測方法

規格

貨號

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶測試盒50管/48樣

紫外分光光度法

50管/48樣

BJ-01S9797

商品介紹:

測定意義:

PEPC(EC 4.1.1.31)廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中,是催化磷酸烯醇式丙酮酸與二氧化碳反應生成草酰乙酸呈不可逆反應的酶,對三羧酸循環的運轉起重要調節作用。

測定原理:

PEPC催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42-,蘋果酸脫氫酶進一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+,在340nm測定NADH減少速率,計算PEPC活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

QQ截圖20220307153443.png 

注意事項:

①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用

樣品制備:

1). 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品,體積可達2.000ml。

2). 過濾混濁溶液。

3). 除去樣品中的CO 2 (果糖含量測試盒說明書過過濾)。

4 ). 果糖含量測試盒說明書過加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調至8.0。

5 ). 調整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。

6 ). 用空白樣品做對照測定有色樣品(如有必要調整PH值至8.0)。

7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經稀釋或體積更大的樣品。

8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。

9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質的樣品去蛋白。

10).含脂肪的樣品用熱水提取。

CPXM2 基因全長ORF克隆

ST7 基因全長ORF克隆

SPATA6 基因全長ORF克隆

SRPX2 基因全長ORF克隆

SRPX 基因全長ORF克隆

PSG6 基因全長ORF克隆

NAPSA 基因全長ORF克隆

DPEP2 基因全長ORF克隆

Q1 基因全長ORF克隆

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操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

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