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貨號 | BJ-X97524 |
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操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
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產品名稱 | |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 |
貨號 | BJ-X97524 |
商品屬性:
名稱 乳腺癌成纖維細胞 2.組織來源:乳腺癌組織 3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介: 人乳腺癌成纖維細胞分離自患有乳腺癌的女性乳腺組織;女性乳腺是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的,乳腺癌是發生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。乳腺癌中99%發生在女性,男性僅占1%。乳腺并不是維持機體生命活動的重要器官,原位乳腺癌并不致命;但由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性,細胞之間連接松散,容易脫落。癌細胞一旦脫落,游離的癌細胞可以隨血液或淋巴液播散全身,形成轉移,危及生命。目前,乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的乳腺癌成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現為小的突起;6h后細胞基本貼壁*,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態,細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。 5.方法簡介: ()實驗室分離的人乳腺癌成纖維細胞采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測: ()實驗室分離的人乳腺癌成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息: 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-H172 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右;3代以內狀態最佳 消化液0.25% 培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
牛免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒進口、組裝
大鼠基質金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B) 免疫試劑盒進口、分裝
大鼠CD34分子(CD34)免疫試劑盒進口、分裝
大腸桿菌顯色培養基 英文名稱:E.Coli Chromogenic Medium 產品規格:1000(ML)
TCBS瓊脂 英文名稱:Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar 產品規格:250g
麥芽糖 英文名稱: 產品規格:20支
小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白2(IGFows\system32\EhStorShell.dll
乳腺癌成纖維細胞Sporothrix schenckii申克孢子細LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HSP105 熱休克蛋白105抗體 規格: 0.1mlMouse Anti-Bov IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的小鼠抗牛IgG 規格: 0.1ml
Duck Enteritis Virus鴨腸炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Defensin β2/DEFB2/HBD-2 防御素β2抗體 規格: 0.1mlC1orf93 1號染色體開放閱讀框93抗體 規格: 0.2ml
Classical Swine Fever Virus-Vaccine(CSFV-Vaccine)豬瘟病毒疫苗株探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ARRDC3 抑制蛋白結構域蛋白3抗體 規格: 0.2mlET-1 內皮素-1抗體 規格: 0.2ml
Radix adenophorae南沙參LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周SNF5 轉錄調控激活蛋白SNF5抗體 規格: 0.2mlCCR-3 細胞表面趨化因子受體3抗體 規格: 0.1ml
Calymmatobacterium granulomatis肉芽腫鞘桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-CK18(Ser74) 磷酸化細胞角蛋白18抗體 規格: 0.1mlNOS-2/iNOS 氮合成-2抗體(誘導型) 規格: 0.1ml
Latino virus(LATV)拉蒂諾病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MEGF5/Slit3 復合型表皮生因子樣結構域蛋白5抗體 規格: 0.2mlHistone H3-like protein 組蛋白H3樣抗體 規格: 0.2ml
Cucumber Mosaic Virus(CMV)黃瓜花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-ASK1(Ser967) 磷酸化細胞凋亡信號調節激1抗體 規格: 0.2mlKLK12 激肽釋放12抗體 規格: 0.1ml
溶血性鏈球熒光LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次PICK1 蛋白激Cα相互作用蛋白1抗體 規格: 0.2mlphospho-Acinus(Ser1180) 磷酸化泡Acinus蛋白抗體 0.1ml
Rickettsia gravesii白堊立克次氏體LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CD10/CALLA/Neprilysin CD10抗體 規格: 0.1mlChloramphenicol 抗體 規格: 0.2ml
Bovine Papular Stomatitis Virus(BPSV)牛丘疹性口炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat Anti-Mouse IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的羊抗小鼠IgM 規格: 0.1mlArfaptin 1 ADP核糖基化因子結合蛋白1抗體 規格: 0.1ml
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