使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細胞類型，設定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉染細胞的篩選

1）     轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4） 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

公司產(chǎn)品具有質量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

產(chǎn)品名稱：蔗糖-PBS溶液價格

貨號：BJ-01R3642

規(guī)格：500ml

分類：脫水劑

儲存條件：4℃,6個月

用途：新鮮組織取材后,沉淀以去除多余水分,避免冷凍后產(chǎn)生冰晶

注意事項：主要由蔗糖、PBS、防腐劑組成。

注意事項：

1、盡注意無菌操作，避免污染。

2、避免反復凍融。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

標準溶液的配制：

1.直接配制法    對于純凈的物質(稱做基準物質)可準確進行稱量，用蒸餾水溶解后，轉移到一定容積的容量瓶中稀釋至標線，溶液的準確濃度可以直接計算出來。溶質的純度、性質等對濃度有較大影響，為此，對用來直接配制標準溶液用的基準物質必須具備以下條件：

(1)物質的純度要高，含量不得低于99.9％，雜質的含量應當少到可以忽略的程度。

(2)物質的分子組成應與其化學式*符合，包括結水合物中的結品水含量也必須與其化學式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。

(3)性質穩(wěn)定，貯蔵時應不發(fā)生變化，不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分，不易風化潮解和被空氣氧化，烘干時不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準物質以減小稱量誤差。

2.間接配制法    凡不符合基準物質條件的物質，可先配制成近似所需濃度的溶液，再用基準物質溶液或能與其發(fā)生定量反應的標準溶液進行滴定，求其準確濃度，這種通過滴定來確定準確濃度的操作叫做“標定"。間接法配制近似濃度溶液時不需用分析天平稱量和容量瓶配制，可用臺秤、量筒等器皿。將稱好的物質轉移到干凈的試劑瓶中，先加少量蒸餾水將其溶解，繼續(xù)用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數(shù)試劑不符合基準物的條件，故間接法配制標準溶液是經(jīng)常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質；濃鹽酸因易揮發(fā)而無法準確稱量；不易得到分析純級的試劑等，這些物質的標準溶液須用間接法來配制，經(jīng)標定后再做標準溶液使用。

標準溶液的標定：

1.用基準物質標定法

(1)多次稱量法    用減重法精密稱取幾份(如2～3份)基準物質，分別倒入編號的干凈錐形瓶(或燒杯)內(nèi)，各加少量蒸餾水溶解，再加指示劑后分別用待標定溶液滴定至等當點，各自記錄所消耗待標定溶液的體積，結合基準物質的重量分別算出溶液的準確濃度，最后取平均值做為標準溶液的濃度。

(2)移液管法    精密稱取一份基準物質，在干凈的小燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解，順玻棒全部轉移到已校正好的容量瓶中，多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中，最后配成一定體積的溶液，混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉移至錐形瓶中，加指示劑后用待標定溶液滴定至等當點，每次做好記錄，根據(jù)所消耗待標定溶液的體積，結合基準物質的重量，分別算出溶液的準確濃度取平均值做為標準溶液的濃度。

2.比較法標定    如果待標定溶液能與某標準溶液進行反應，可吸量一定體積的某標準溶液，用待標定溶液滴定，或吸量一定體積的待標定溶液，用某標準溶液滴定。根據(jù)兩溶液所消耗的毫升數(shù)及某標準溶液的濃度，按N1V1＝N2V2式可以計算出待標定溶液的準確濃度。這種用標準落液來測定待標定溶液準確濃度的過程稱為“比較法"標定。如果某標準溶液的濃度由于某些原因不夠準確時，就會直接影響待標定溶液濃度的準確性，顯然比較法不如用基準物質直接標定的方法精確，但比較法簡便易行。

標定完畢，蓋緊標準溶液試劑瓶塞，瓶簽上注明標準溶液名稱、準確濃度和日期等。

Pericarpium zanthoxyli花椒LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Rabbit anti-MG IgG/HRP  辣根過氧化物標記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Tick-borne Hemorrhagic Fever Virus(TBHFV)蜱傳出血熱病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周TKTL1  酮基移換樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Simian Type-D Retrovirus(SRV)猴D型逆轉錄病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-Pyk2 (Tyr881)  磷酸化富含脯的酪激2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Beet Yellows Virus(BYV)甜菜黃化病毒PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-CD19(Tyr531)  磷酸化CD19抗體 規(guī)格: 0.1ml

Canine Rotavirus（CRV）犬輪狀病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-Bov IgG/Cy5.5  Cy5.5標記的兔抗牛IgG  規(guī)格: 0.1ml

Neisseria meningitidis Group Y腦膜炎奈瑟Y群LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Polycystin 2  多囊蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Bovine Papillomavirus()牛瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HDAC6  組蛋白去乙酰化6抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rhizoma curcumae莪術染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周BAG5  BCL2分子伴侶調(diào)節(jié)蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml

Fusarium solani茄病鐮刀LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-SYN1(Ser62+Ser67)  磷酸化神經(jīng)突觸素1抗體 0.1ml

Nocardia otitidiscaviarum豚鼠耳炎諾卡探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的羊抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml

蔗糖-PBS溶液價格Cyclin F  周期F抗體 規(guī)格: 0.1mlDDX53/CT26  瘤/睪抗原26抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-MEK5(Ser311+Thr315)  磷化絲裂原活化激激5抗體 規(guī)格: 0.1ml

FAM154A  FAM154A抗體 規(guī)格: 0.2ml

TPO/Thrombopoietin  小板生成抗體(巨核細胞集落刺激因子) 規(guī)格: 0.1ml

H5N1-H5  H5亞型全病毒抗體 0.1ml

JAM1  連接粘附分子1抗體 規(guī)格: 0.1mlWNT4  信號通路Wnt4抗體 規(guī)格: 0.2ml

Donkey Anti-human IgG/FITC  FITC標記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.3ml

NTF97/KPNB1  親核β1抗體 規(guī)格: 0.1mlATM  毛細管擴張性共濟失調(diào)癥突變抗體 規(guī)格: 0.1ml

Proteasome 20S beta 7  體PSMβ7抗體 規(guī)格: 0.2ml

IL-17D/IL-27  白介-17D抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-c-Abl(Thr754)  磷化非受體激c-Abl抗體 0.1ml