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多瘤病毒熒光定量PCR試劑盒探針法

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具體成交價以合同協議為準

產品型號

品       牌其他品牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-07-22 11:50:01瀏覽次數:106次

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產地 國產 加工定制
適用領域 科研 貨號 BJ-P10217
多瘤病毒熒光定量PCR試劑盒探針法公司正在出售的產品:P-CK/Cytokeratin AE1 + AE3 廣譜細胞角蛋白PCK抗體 規格: 0.1mlDonkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的驢抗豚鼠IgG 規格: 0.1mlFBXO31 F-box蛋白家族FBXO31抗體 規格: 0.2mlCETP 酯轉移

操作流程

1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區、樣本處理區和PCR擴增區進行操作,各區實驗服、儀器 、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區應該配有紫外線殺菌裝置。

2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。

3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。

4. 所有試劑在使用應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。

5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在一次使用應全部轉移至標本準備區,并單獨存放。

6. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。

7. 儀器 擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用。

8. ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。

9. 實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。

特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!

產品名稱

英文名稱

規格

貨號

多瘤病毒熒光定量PCR試劑盒探針法

Washington University Polyomavirus(WUPyV)WU

多種規格

BJ-P10217

2.jpg

特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。

2. 根據鮑皰疹樣病毒保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。

3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。

4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續污染。

5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。

6. 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

儲存條件:-20℃以下,有效期12個月。

PCR檢測試劑盒 (2).jpg


實驗過程:

一、試劑準備

1. DNA模板

2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)

3.10×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5.Taq酶

 

二、操作步驟

1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物110pM              2μl

引物210PM             2μl

Taq酶(2U/μl           1μl

DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl

ddH2O              50 μl

PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min

3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

三、注意事項

1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。設立一個專用的PCR實驗室。

2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。

3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。

4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。

5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。

6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。

7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。

 

 

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