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備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)?
產品名稱 | 小鼠己糖激酶(HK)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Mouse hexokinase (HK) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G9881 |
規格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復性好
用途:科研實驗等領域科學研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
EDAR Others Cynomolgus 食蟹猴 EDAR 人細胞裂解液 (陽性對照) 1-[3-(*氧基硅基)丙基]脲(>94.0%(N))質量規格:>94.0%(N)1-[3-(Trimethoxysilyl)propyl]urea
敘利亞倉鼠細胞系;Syrian Hamster AV12芐酰基無色亞甲基蘭(>95.0%(HPLC)(T))質量規格:>95.0%(HPLC)(T)Benzoyl Leuco Methylene Blue
Calu-3細胞,人肺腺癌細胞(胸膜滲出液) 大鼠肝星形細胞,CFSC-8B細胞 CM-M089小鼠皮膚肥大細胞*培養基100mL結晶紫內酯(>95.0%(HPLC)(T))質量規格:>95.0%(HPLC)(T)Crystal Violet Lactone
SiHa(人子宮頸鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×26'-(二乙氨基)-1',3'-二甲基熒烷(>98.0%(HPLC)(T))質量規格:>98.0%(HPLC)(T)6'-(Diethylamino)-1',3'-dimethylfluoran
HUVEC-c 單一來源的人臍靜脈內皮細胞(HUVEC) 500,000cells 表皮角化細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)三丁基化锍(>96.0%(T))質量規格:>96.0%(T)Tributylsulfonium Iodide
CL-0426RKO-E6(人結腸癌轉基因細胞)5×106cells/瓶×2無水鈷25克2~8℃
人星形膠質細胞2-(三丁基錫) 97% 2-(TRIBUTYLSTcNNYL)THIOPHqNq 24663-78-4
人胚肺二倍體細胞;HL 人小腸粘膜上皮細胞*培養基 100mL嶙酸二氫錳10克RT
人類原巨核細胞型白血病細胞;UT-7球蛋白抗原兔IgG12毫升
LAG3 Others Rat 大鼠 LAG3 / CD223 / Lymphocyte activation gene 3 人細胞裂解液 (陽性對照) 33719-74-33.5-二錄,98%3,5-Dichloroanisole
原代神經膠質細胞特制基礎培養基Many types of cells包裝:500/250/100mlDL-異亮酸shēng huà shì jì容量:100克
6T-CEM細胞,人T細胞白血病細胞 綠色熒光蛋白標記小鼠子細胞,U14-GFP細胞 前脂肪細胞分化培養基PADM-prf4-苯 4-Fluorobenzoic acid,98% 456-22-4 25G 通用試劑
NCI-H1703(人肺鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2全拂忻基磺醋四基銨 98% Hqptcdqccfluorooctcnqsulfonic ccid tqtrcqthylcmmonium sclt 26773-4-3
BHK-21(倉鼠腎細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M022小鼠甲狀腺上皮細胞*培養基100mL 人B細胞瘤細胞;RAMOSN-芴甲氧羰基-L-羥脯酸,英文名或英文縮寫:Fmoc-Hyp-OH,級別:特,99%,規格:100克
CM-H006人肺動脈成纖維細胞*培養基100mL2695-47-86-溴-1-己16-Bromo-1-hexene
小鼠己糖激酶(HK)elisa進口試劑盒TNFRSF1B Others Human 人 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 人細胞裂解液 (陽性對照) 抗蛋白酶(進口)Antipain di質量規格:美國進口
人神經束膜細胞HPCD-巖藻糖D-(+)-FUCOSE質量規格:>98%,日本進口原裝
CD44 Others Human 人 CD44 人細胞裂解液 (陽性對照) N-乙酰-DL-絲氨酸N-Acetyl-DL-Serine質量規格:>98%,BR
L132 人肺上皮細胞玉米素Zeatin質量規格:>98%,BR
CM-H059人子宮頸上皮細胞*培養基100mL水飛薊素Silymarin質量規格:水飛薊素UV 80%;單賓30%
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