使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）     轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

公司產(chǎn)品具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

產(chǎn)品名稱：迪夫快速染色液價(jià)格

貨號：BJ-01R3560

規(guī)格：2×100ml

分類：細(xì)胞染色

儲存條件：室溫,避光,12個(gè)月

用途：主要用于血細(xì)胞涂片、骨髓涂片、陰道分泌物涂片、脫落細(xì)胞涂片的染色。

注意事項(xiàng)：不含固定液。與Wright Stain類似都是利用Romanowsky Stain技術(shù)原理改良而來的,染色結(jié)果與瑞氏染色液也極其相似,但迪夫快速染色所需的時(shí)間極短,一般90s以內(nèi)即可完成染色。

注意事項(xiàng)：

1、盡注意無菌操作，避免污染。

2、避免反復(fù)凍融。

3、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：

1.直接配制法    對于純凈的物質(zhì)(稱做基準(zhǔn)物質(zhì))可準(zhǔn)確進(jìn)行稱量，用蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到一定容積的容量瓶中稀釋至標(biāo)線，溶液的準(zhǔn)確濃度可以直接計(jì)算出來。溶質(zhì)的純度、性質(zhì)等對濃度有較大影響，為此，對用來直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液用的基準(zhǔn)物質(zhì)必須具備以下條件：

(1)物質(zhì)的純度要高，含量不得低于99.9％，雜質(zhì)的含量應(yīng)當(dāng)少到可以忽略的程度。

(2)物質(zhì)的分子組成應(yīng)與其化學(xué)式*符合，包括結(jié)水合物中的結(jié)品水含量也必須與其化學(xué)式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。

(3)性質(zhì)穩(wěn)定，貯蔵時(shí)應(yīng)不發(fā)生變化，不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分，不易風(fēng)化潮解和被空氣氧化，烘干時(shí)不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準(zhǔn)物質(zhì)以減小稱量誤差。

2.間接配制法    凡不符合基準(zhǔn)物質(zhì)條件的物質(zhì)，可先配制成近似所需濃度的溶液，再用基準(zhǔn)物質(zhì)溶液或能與其發(fā)生定量反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定，求其準(zhǔn)確濃度，這種通過滴定來確定準(zhǔn)確濃度的操作叫做“標(biāo)定"。間接法配制近似濃度溶液時(shí)不需用分析天平稱量和容量瓶配制，可用臺秤、量筒等器皿。將稱好的物質(zhì)轉(zhuǎn)移到干凈的試劑瓶中，先加少量蒸餾水將其溶解，繼續(xù)用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數(shù)試劑不符合基準(zhǔn)物的條件，故間接法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液是經(jīng)常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質(zhì)；濃鹽酸因易揮發(fā)而無法準(zhǔn)確稱量；不易得到分析純級的試劑等，這些物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液須用間接法來配制，經(jīng)標(biāo)定后再做標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定：

1.用基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定法

(1)多次稱量法    用減重法精密稱取幾份(如2～3份)基準(zhǔn)物質(zhì)，分別倒入編號的干凈錐形瓶(或燒杯)內(nèi)，各加少量蒸餾水溶解，再加指示劑后分別用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn)，各自記錄所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度，最后取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

(2)移液管法    精密稱取一份基準(zhǔn)物質(zhì)，在干凈的小燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解，順玻棒全部轉(zhuǎn)移到已校正好的容量瓶中，多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中，最后配成一定體積的溶液，混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加指示劑后用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn)，每次做好記錄，根據(jù)所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量，分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

2.比較法標(biāo)定    如果待標(biāo)定溶液能與某標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行反應(yīng)，可吸量一定體積的某標(biāo)準(zhǔn)溶液，用待標(biāo)定溶液滴定，或吸量一定體積的待標(biāo)定溶液，用某標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。根據(jù)兩溶液所消耗的毫升數(shù)及某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，按N1V1＝N2V2式可以計(jì)算出待標(biāo)定溶液的準(zhǔn)確濃度。這種用標(biāo)準(zhǔn)落液來測定待標(biāo)定溶液準(zhǔn)確濃度的過程稱為“比較法"標(biāo)定。如果某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度由于某些原因不夠準(zhǔn)確時(shí)，就會(huì)直接影響待標(biāo)定溶液濃度的準(zhǔn)確性，顯然比較法不如用基準(zhǔn)物質(zhì)直接標(biāo)定的方法精確，但比較法簡便易行。

標(biāo)定完畢，蓋緊標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶塞，瓶簽上注明標(biāo)準(zhǔn)溶液名稱、準(zhǔn)確濃度和日期等。

Taenia solium鏈狀帶絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-rat IgG/Gold  膠體金標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 2mlNG2/CSPG4  黑色素瘤蛋白多糖4抗體 規(guī)格: 0.2ml

Encephalitozoon spp.腦胞內(nèi)原蟲屬通用·染料法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Smac/DIABLO  線粒體促凋亡蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-TAK1(Ser412)  磷酸化轉(zhuǎn)化生因子β活化激1 規(guī)格: 0.1ml

Duck Tambusu Virus（TMUV）鴨坦布蘇病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周LTB4-R2  白三烯B4受體2抗體 規(guī)格: 0.1mltubulin Beta  微管蛋白β tubulin抗體 Tubulin β 規(guī)格: 0.1ml

Hepatitis D Virus(HDV)丁型肝炎病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周AXL/UFO  粘附相關(guān)激抗體 規(guī)格: 0.1mlODC  鳥脫羧抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rathayibacter rathayi鴨茅蜜穗病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit Anti-pig IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗豬IgG 規(guī)格: 0.1mlCSFV/Classical swine fever virus  豬瘟毒抗體 0.2ml

Cortex cinnamomi肉桂PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周HEC1  細(xì)胞高表達(dá)蛋白Hec1抗體 規(guī)格: 0.2mlDCAF12/WDR40A  睪中心體相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Louping Ill Virus跳躍病病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Donkey Anti-Guinea pig IgG/AP  堿性磷酸（AP）標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlZnT-1  鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Serratia liquefaciens液化沙雷探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Jun B  活化蛋白激B抗體 規(guī)格: 0.1mlCCDC5  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml

Pericarpium citri reticulatae陳皮探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Rabbit Anti-Bovine IgM/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.3mlRab27a  RAM-11抗體 規(guī)格: 0.2ml

Grass Carp Reovirus(GCRV)草魚呼腸孤病毒1型RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周C4orf14  4號染色體開放閱讀框14抗體 規(guī)格: 0.2mlglypican 3/GPC3  磷脂酰基醇蛋白聚糖-3抗體 規(guī)格: 0.1ml

迪夫快速染色液價(jià)格Ⅲ;Sudan III；Solve 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢 Hep B1.2(人肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

環(huán)  英文名稱：Ciprofloxacin   保存：-20℃   規(guī)格：100mg 黑色素瘤相關(guān)抗原抗體B6抗體  

羥基地美唑 對照品 訂購|咨詢 規(guī)格： 100mg;99.6% 絲氨/蘇氨蛋白激ICK抗體 RSPO1 ELISA Kit R-脊椎蛋白1(RSPO1)ELISA試劑盒

2"-O-沒食子酰基金絲桃苷  英文名稱：2 "-O- galloyl hyperin   保存：-20℃   規(guī)格：10mg 化蛋白激R抗體

地 訂購|咨詢 規(guī)格： 20mg 化表皮生長因子受體抗體 NPVF ELISA Kit 神經(jīng)肽VF(NPVF)ELISA試劑盒

唑鎂  英文名稱：Omeprazole magnesium   保存：-20℃   規(guī)格：100mg 原鈣粘蛋白γA8抗體

知母皂苷B 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 ELISA Kit for Human Apolipoprotein A-IV小鼠纖溶抗纖溶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒，英文名：PAP ELISA Kit

5-羥基鹽心得安 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 5-Hydroxy Propranolol Hydrochloride 豚鼠心肌來源細(xì)胞英文名稱：GPH4

訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%，50mg/vial 受體(GH receptor)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL小鼠基質(zhì)金屬9(MMP9)ELISA試劑盒，英文名：MMP9 ELISA Kit

女貞苷  英文名稱：Ligustrum Lucidum Ait   保存：-20℃   規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支 端粒相關(guān)蛋白2/端粒逆轉(zhuǎn)錄抗體

6-姜;姜辣素;姜 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支 人肌細(xì)胞生成素(Myogenin)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒，英文名：HSP-40 ELISA Kit

  英文名稱：Propofol   保存：-20℃   規(guī)格：300mg 過氧化物肌氨氧化抗體

櫻草素 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 血型糖蛋白δ抗體 KALRN ELISA Kit 鉀蛋白(KALRN)ELISA試劑盒