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商品介紹：

測定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環（TCA）的主要氫受體，生成的NADH經呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時，形成大量的ROS，同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環。另外，NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。

測定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進一步采用MTT還原法檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

注意事項：

①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用

樣品制備：

1）. 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達2.000ml。

2）. 過濾混濁溶液。

3）. 除去樣品中的CO 2 （果糖含量測試盒說明書過過濾）。

4 ）. 果糖含量測試盒說明書過加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調至8.0。

5 ）. 調整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。

6 ）. 用空白樣品做對照測定有色樣品（如有必要調整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經稀釋或體積更大的樣品。

8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質的樣品去蛋白。

10）.含脂肪的樣品用熱水提取。

乙醇脫氫酶（ADH）測試盒    微量法    乙醇脫氫酶測試盒100管/96樣

乙醇脫氫酶（ADH）測試盒    紫外分光光度法    乙醇脫氫酶測試盒50管/48樣

單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測試盒    微量法    單脫氫抗壞血酸還原酶測試盒100管/96樣

單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測試盒    紫外分光光度法    單脫氫抗壞血酸還原酶測試盒50管/48樣

甲醛脫氫酶（FDH）測試盒    微量法    甲醛脫氫酶測試盒100管/96樣

甲醛脫氫酶（FDH）測試盒    紫外分光光度法    甲醛脫氫酶測試盒50管/48樣

乙醛脫氫酶（ALDH）測試盒    微量法    乙醛脫氫酶測試盒100管/96樣

乙醛脫氫酶（ALDH）測試盒    紫外分光光度法    乙醛脫氫酶測試盒50管/48樣

輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒    微量法    輔酶ⅡNADP測試盒100管/48樣

輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒    可見分光光度法    輔酶ⅡNADP測試盒50管/24樣

NADP磷酸酶（NADPase）測試盒    微量法    NADP磷酸酶測試盒100管/96樣

NADP磷酸酶（NADPase）測試盒    可見分光光度法    NADP磷酸酶測試盒50管/48樣

6磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒    微量法    6磷酸葡萄糖脫氫酶測試盒100管/96樣

6磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒    紫外分光光度法    6磷酸葡萄糖脫氫酶測試盒50管/48樣

胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒    微量法    胞漿異檸檬酸脫氫酶測試盒100管/96樣

胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒    紫外分光光度法    胞漿異檸檬酸脫氫酶測試盒50管/48樣

NADP蘋果酸酶（NADPME）測試盒    微量法    NADP蘋果酸酶測試盒100管/96樣

NADP蘋果酸酶（NADPME）測試盒    紫外分光光度法    NADP蘋果酸酶測試盒50管/48樣

小鼠骨髓間充質干細胞（EGFP標記）

人骨髓間充質干細胞（hMSCs）

人間充質干細胞-脂肪

人間充質干細胞-肝

人間充質干細胞-臍帶

小鼠神經干細胞

小鼠海馬神經膠質細胞（EGFP標記）

小鼠皮層神經膠質細胞（EGFP標記）

小鼠神經干細胞（EGFP標記）

人腦微血管內皮細胞

人腦血管平滑肌細胞

人海馬神經元

人少突膠質細胞

人星形膠質細胞

小鼠成纖維細胞（EGFP標記）

mCF, 小鼠心臟成纖維細胞

MN-c, 小鼠皮質神經元

輔酶ⅠNAD測試盒50管/24樣MN-h, 小鼠海馬神經元

MSC, 小鼠雪旺細胞

MA, 小鼠星形膠質細胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞

操作流程：

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。