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貨號	FS-X9735

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：Caspase-6活性測定試劑盒

英文名稱：Caspase-6 Activity colorimetric assay Kit

產品規(guī)格：20T|50T|100T

貨號：FS-X9735

產品介紹:

本試劑盒測定哺乳動物組織、細胞caspase-6活性。試劑盒測定原理基于Caspase-6特異水解其多肽底物Ac-VEID-pNA(N-acetyl-Val-Glu-Ile-Asp-p-nitroanilide)，釋放出游離的硝基pNA，后者呈黃色在405nm具有大吸收峰，用可見光分光光度比色方法測定。其吸光度值對應于Caspase-6的水解活性。

Caspase-6也稱Mch-2，其前體蛋白被granzyme B剪切后形成活化的caspase-6二聚體，可誘導細胞凋亡。細胞凋亡屬于程序化細胞死亡，可見于各種器官和細胞，在正常發(fā)育、生理、病理過程中對細胞和器官的穩(wěn)態(tài)具有十分重要的調節(jié)作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含10多個成員。Caspase-6也稱Mch-2，其前體蛋白被granzyme B剪切后形成活化的caspase-6二聚體，可誘導細胞凋亡。Caspase-6可剪切凋亡的關鍵調節(jié)蛋白PARP，剪切核膜上關鍵蛋白Lamin A，其對于Lamin A的識別位點是VEID。

運輸及保存：試劑常溫運輸。到達后按要求儲存，1年內穩(wěn)定。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

III型前膠原基末端肽(PⅢNP)英文名：PⅢNP Bcl2相互作用蛋白1抗體（轉化相關基因8蛋白）包裝100g

G蛋白偶聯(lián)膽汁受體1(GPBAR1)英文名：GPBAR1 骨形態(tài)發(fā)生蛋白5抗體包裝25g

GATA結合蛋白4(GATA4)英文名：GATA4 骨形態(tài)發(fā)生蛋白15抗體包裝1g

FMS樣酪激3配體(Flt3L)英文名：Flt3L Bcl-2樣蛋白2抗體包裝250mg

FMS樣酪激3(Flt3)英文名：Flt3 殺菌/通透性增強蛋白抗體包裝5g

FAM84A蛋白(FAM84A)英文名：FAM84A Bcl-2抗體包裝25g

FAM172A蛋白(FAM172A)英文名：FAM172A 腦轉錄因子4蛋白抗體包裝5g

E選擇(E-Selectin/CD62E)英文名：E-Selectin/CD62E 膽鹽激活脂肪抗體包裝1mg

E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)英文名：E-Cad 3-羥丁脫氫抗體包裝25g

E3泛蛋白連接TRIM68(TRIM68)英文名：TRIM68 長鏈脂肪酰基解抗體包裝5g

D-乳脫氫(D-LDH)英文名：D-LDH 磷化癌易感基因1抗體包裝10mg

D二聚體(D2D)英文名：D2D 磷化β分泌抗體包裝50mg

DNA(胞嘧啶-5)基轉移3B(DNMT3B)英文名：DNMT3B 磷化相關死亡促進因子抗體包裝1g

DNA(胞嘧啶-5)基轉移3A(DNMT3A)英文名：DNMT3A 磷化相關死亡促進因子抗體包裝25g

DNA(胞嘧啶-5)基轉移1(DNMT1)英文名：DNMT1 磷化Bcl-2抗體包裝5g

芳香乙酰脫乙酰基樣蛋白2抗體肝核因子1β(HNF1β)LCL161 is an orally bioavailable second mitochondrial-derived activator of caspa
Caspase-6活性測定試劑盒ATCC 10211 氧基硅醌氧化還原1

斜頂 4-二基丁縮二甲賴氨酰氧化

相思根瘤 2-(基硅基)噻吩蛋白激

聚貪氏 3,5-二叔丁基水楊酸酪蛋白激受體A2

枯草芽孢桿對甲草酸二酯酪酸蛋白激受體A7抗體

Nocardioides 4-乙氧基-1-萘甲酸酪

非脫羧勒克 N-叔丁氧羰基-5-溴酪酸激2

枯草芽孢桿 2,8-二甲基-2,3,4,5-四氫-1H-吡啶并[4,3-b]酪酸激受體

球孢白僵 6-羥基吡啶-2-羧酸

赭色擲孢酵母 9,9-二辛基芴-2,7-雙(酸頻哪酯)酪酸羥化

釀酒酵母 N-環(huán)戊基甘甲酯鹽酸鹽酪氨酰DNA 磷酸二酯1

美澳型核果褐腐病鄰芐氧苯酪酪肽；多肽YY

耶納農球 4,6-二甲基-2-庚酮雷帕霉靶蛋白

枯草芽孢桿 3,4-二羥基噻吩-2,5-二羧酸二乙酯類白抗原C

Bacillus tequilensis 4--3-鹽酸鹽類風濕因子
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)