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當前位置：上海撫生實業有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>> 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(WST-1法)
| 貨號 | FS-X9529 |
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英文名稱：WST-1 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
產品規格：100次|500次
貨號：FS-X9529
產品介紹:
本試劑盒是一種廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。WST-1是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan(參考下圖)。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。 WST-1是MTT的一種升級替代產品，和MTT或其它MTT類似產品如XTT、MTS等相比有明顯的優點。首先，MTT被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-1和XTT、MTS產生的formazan都是水溶性的，可以省去后續的溶解步驟。其次，WST-1產生的formazan比XTT和MTS產生的formazan更易溶解。再次，WST-1比XTT和MTS更加穩定，使實驗結果更加穩定。另外，WST-1和MTT、XTT等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高(參考下圖)。 本試劑盒可以用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測，或一些藥物誘導的細胞生長抑制檢測等。 本試劑盒檢測非常便捷。無須使用同位素，所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內完成。不必洗滌細胞，不必收集細胞，也不必采用額外步驟去溶解formazan。可以用于大批量樣品的檢測。 酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。WST-1對細胞無明顯毒性。加入WST-1顯色后，可以在不同時間反復用酶標儀讀板，使檢測時間更加靈活，便于找到佳測定時間。 注意事項： 由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養時間較長，一定要注意蒸發的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈容易蒸發，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方，以緩解蒸發。 |
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
肝素酶2(HPA2)檢測試劑盒 forHeparanase2(HPA2)
磷酸烯醇式酸羧激酶1(PCK1)檢測試劑盒 forPhosphoenolpyruvateCarboxykinase1,Soluble(PCK1)
干擾素γ(IFNγ)檢測試劑盒 forInterferonGamma(IFNg)
多巴胺轉運蛋白(DAT)檢測試劑盒 forDopamineTransporter(DAT)
中間α-球蛋白抑制因子H5(ITIH5)檢測試劑盒 forInterAlpha-GlobulinInhibitorH5(ITIH5)
巖藻糖基轉移酶3(FUT3)檢測試劑盒 forFucosyltransferase3(FUT3)
血紅蛋白(HB)檢測試劑盒 forHemoglobin(HB)
銅伴侶超氧化物歧化酶(SOD4)檢測試劑盒 forSuperoxideDismutase,CopperChaperone(SOD4)
B-細胞淋巴瘤因子10(Bcl10)檢測試劑盒 forB-CellCLL/Lymphoma10(Bcl10)
5-羥色胺受體1A(HTR1A)檢測試劑盒 for5-HydroxytryptamineReceptor1A(HTR1A)
葡萄糖苷酸酶β(GUSβ)檢測試劑盒 forGlucuronidaseBeta(GUSb)
膜聯蛋白A4(ANXA4)檢測試劑盒 forAnnexinA4(ANXA4)
酸脫氫酶β(PDHβ)檢測試劑盒 forPyruvateDehydrogenaseBeta(PDHb)
Codanin1蛋白(CDAN1)檢測試劑盒 forCodanin1(CDAN1)
Cornulin蛋白(CRNN)檢測試劑盒 forCornulin(CRNN)
纖維蛋白原α(FGα)檢測試劑盒 forFibrinogenAlpha(FGa)
FMS樣氨酸激酶3(Flt3)檢測試劑盒 forFMSLikeTyrosineKinase3(Flt3)
細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(WST-1法)氨苯丁酯標準品 規格:200mg 英文名稱：Butamben
羥苯丙酯標準品 規格:200mg 英文名稱：Propylparaben
伐他汀鈉標準品 規格:350mg 英文名稱：Fluvastatin Sodium
拉西泮相關物質C標準品 規格:25mg 英文名稱：Lorazepam Related Compound C
丙沙星甲酰胺標準品 規格:125mg 英文名稱：Ciprofloxacin Formamide
美脲標準品 規格:200mg 英文名稱：Glimepiride
胺太林相關物質A標準品 規格:50mg 英文名稱：
萬拉法新相關物質A標準品 規格:10mg 英文名稱：
愈創酚甘油醚標準品 規格:200mg 英文名稱：Guaifenesin
諾沙星標準品 規格:200mg 英文名稱：Enrofloxacin
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