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貨號	FS-X9699

產品屬性：

產品名稱	英文名稱	產品規(guī)格	產品貨號
Annexin V-APC/PI細胞凋亡檢測試劑盒		50T\|100T	FS-X9699

產品介紹：

產品背景：

細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。

在正常細胞中，磷脂酰絲氨suan(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨suan(PS)由脂膜內側翻向外側。在體內，巨噬細胞可以識別翻轉到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。

AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS 高親和力特異性結合。PS 外翻發(fā)生在細胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。

檢測原理：

在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨suan(phosphotidylserine，PS)位于細胞膜的內側，但在早期凋亡的細胞中，PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中。

Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結合。可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨suan與凋亡早期細胞的胞膜結合。用標記了APC的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。細胞壞死的過程中也會發(fā)生細胞膜損傷，壞死的細胞會結合Annexin V-APC。

Annexin V-APC 通常與細胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測凋亡細胞。常用的染料是PI。正常細胞和早期凋亡細胞的細胞膜是完整的，核酸染料PI 不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和壞死細胞，PI 能夠透過細胞膜與細胞核結合呈現(xiàn)紅色。

PI/Annexin V-APC試劑盒將Annexin Ⅴ與PI匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。壞死細胞可以同時與Annexin V-APC和PI 結合顯色，而PI 則被排除在活細胞(APC陰性)和早期凋亡細胞(APC陽性)之外。

Annexin V-APC 細胞凋亡檢測試劑盒可以方便快捷的檢測凋亡細胞，使用流式細胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備進行檢測。

儲存條件：染色液2-8℃避光保存；結合液2-8℃保存；

注意事項：

1、本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。

9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可，白細胞需要培養(yǎng)較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。

免疫球蛋白A(IgA)英文名：IgA 磷化促腎上腺皮質激ACTH抗體包裝25mg

輪狀病毒(RV)抗原(Ag)英文名：Ag 磷化蛋白激AKT1抗體包裝25g

卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)英文名：OVA sIgG 磷化蛋白激B抗體包裝1g

卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)英文名：OVA sIgE 磷化鈉ATP蛋白a1抗體包裝100g

卵泡抑(FS)英文名：FS 磷化內收蛋白a1抗體包裝25g

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硫氧還蛋白還原(TrxR)英文名：TrxR 磷化腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝250mg

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磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)英文名：PI Ab-IgG/IgM 粘附調節(jié)分子1抗體包裝1g

磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC-3)英文名：GPC-3 氣味結合蛋白抗體包裝5g

磷脂D2(PLD2)英文名：PLD2 乙脫氫2抗體包裝1g

磷脂A2(PL-A2)英文名：PL-A2 膜粘連蛋白10抗體包裝1g

磷脂肌3激(PI3-K)英文名：PI3-K 前梯度同源蛋白2抗體包裝250mg

磷腺苷(cAMP)英文名：cAMP 乙脫氫5抗體包裝100g

磷烯式羧激(PCK)英文名：PCK 通用轉錄因子IIA樣因子抗體包裝25g

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Annexin V-APC/PI細胞凋亡檢測試劑盒白僵 2,3-二甲氧基成熟促進因子

卡卡杜兒玉氏酵母苯甲酰甲酸甲酯成纖維活化蛋白

釀酒酵母氨基乙硫酸氫鹽成纖維生長因子

黑曲霉 4-嗎啉成纖維生長因子10

阿穆爾斯克灣鹽地桿磷酸三聚成纖維生長因子19

簇生離褶傘 4-氨基-2-羥基嘧啶-5-羧酸乙酯成纖維生長因子21

蓋囊側耳 4-溴-5--2-氟甲苯成纖維生長因子23

草類芽孢桿 2,6-二溴吡啶-4-羧酸程序性死亡分子-1

鍺栓孔亞鐵程序性死亡配體-1

平菇 3-甲基-2-(4-)丁酸穿孔蛋白1

群結腐霉 5-溴-1H--3-甲垂草扁桃酸

非食用色俾士麥棕對照液 (4-甲氧苯基)肼垂體中葉

毛柄(金針菇) 4--5-甲基-2氨基嘧啶雌二

釀酒酵母 4-溴-3-羥基苯甲雌

白耙齒 4-硝基-1,3-苯二硫酸鹽雌受體

操作步驟：

1、貼壁細胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細胞消化時間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的*細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。