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精子活體染色液(伊紅法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 14:08:53瀏覽次數:177次

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貨號 FS-X9930
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產品介紹:

用途:

評估精子存活率,鑒別不活動精子膜結構和功能的完整性

注意事項:

伊紅滴染法,可通過檢測精子膜的完整性來評價精子的存活率

儲存條件:室溫,12個月

中文名稱:精子活體染色液(伊紅法)

英文名稱:

產品規格:10ml

貨號:FS-X9930

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

細長賴芽胞桿菌巴爾得-別德爾綜合征相關蛋白4抗體Human GINS3 小鼠αN已酰基葡糖(αNAG)免疫試劑盒

葡萄座腔菌巴爾得-別德爾綜合征相關蛋白7抗體Human GIPC2 小鼠αL巖藻糖(AFU)免疫試劑盒

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Maribius pelagius促凋亡BNIP3L蛋白抗體Human GK3P 小鼠α1干擾(IFN-α1)免疫試劑盒

費氏桿菌費氏亞種Bcl2抑凋亡蛋白Bag3抗體Human GJB6 小鼠Wnt-3a蛋白(WNT3A)免疫試劑盒

小孢毛霉BCL2樣10促凋亡蛋白抗體Human GIYD2 小鼠Wnt-10b蛋白(WNT10B)免疫試劑盒

黃微綠鏈霉菌BCL2樣12含脯蛋白抗體Human GFPT2 小鼠V-Ha-Ras肉瘤病癌基因同源物(HRAS)免疫試劑盒

黑曲霉BCL2分子伴侶調節蛋白5抗體Human Giantin 小鼠T活化連接蛋白(LAT)免疫試劑盒

谷棒桿菌Ⅰ型轉錄因子BTF3抗體Human GJC2 小鼠T表面糖蛋白CD3 epsilon鏈(CD3E/T3E)免疫試劑盒

貝倫格葡萄座腔菌Bcl2相互作用蛋白2抗體Human GFRA2 小鼠T白血病同源盒蛋白1(Tlx1/Hox11/Tlx-1)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌癌擴增序列蛋白4抗體Human GFRA3 小鼠Toll樣受體7(TLR7)免疫試劑盒

大腸埃希菌磷化T淋巴受體抗體Human GIMAP5 小鼠Toll樣受體5(TLR-5)免疫試劑盒

結核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質量規格:>98%,BRβ基己糖A試劑盒去基雛葉龍膽

茄絲核菌Thanatephorus│cucumeris (A.B. Frank) Donk 質量規格:>98%,BRβ4整合試劑盒羥基異亮

: ATCC29358資源名稱: 有害片球菌 質量規格:>98%,BRβ2轉鐵蛋白試劑盒去氫松香
精子活體染色液(伊紅法)河流桿 3-氨基-2-氟隱孢子蟲抗體

鏈格孢(可訂購) 1-Boc--3-甲酰芽囊原蟲抗體

孢小克銀漢霉輪生變種 5--2-甲氧基膜型絲蛋白2

普氏糞桿 2-溴-6-氟苯輪狀病IgM抗體

擬青霉 5-羧基-2-苯磷化組蛋白

球孢白僵 鹽羅匹尼羅三磷肌

布氏蟲草 4-乙基環己烷甲磷脂酰肌

Sphingopyxis contaminans  3-聯苯頻那酯四磷肌

產克雷伯氏 2-溴咪唑并[1,2-a]吡白介34

灰黃青霉 四氫異喹啉白介5受體α

猴頭 喹喔啉白介3受體α

Bacillus myloliquefaciens subsp. plantarum  3--4-氟苯磺酰抗表皮基底膜抗體

青霉屬 特比萘芬NOD樣受體家族蛋白3

Pestalotiopsis neglecta 5-溴-2-甲基-3-硝基吡啶糖基化載脂蛋白A1

紅色紅曲霉 3,5-二ATP合成

 


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