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抗酸染色液(改良Kinyoun冷染法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 16:08:09瀏覽次數:656次

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貨號 FS-X10119
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產品介紹:

用途:

抗酸菌(諾卡菌和紅球菌等)染色,可鑒別抗酸菌與非抗酸菌

注意事項:

抗酸菌或弱酸菌(諾卡菌和紅球菌等)呈紅色,非抗酸桿菌和背景呈淺藍色。主要由復紅液、脫色液組成。

儲存條件:室溫,避光,12個月

中文名稱:抗酸染色液(改良Kinyoun冷染法)

英文名稱:

產品規格:3×50ml|3×100ml

貨號:FS-X10119

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

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串泡雙型毛霉細小變種EFR3A蛋白抗體Human ISOC2 (Isochorismatase domain-containing protein 2) 人25羥基維生D2(25 HVD2)免疫試劑盒

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天山中慢生根瘤菌Mesorhizobium│tianshanense 質量規格:Standard for GC,≥99%(HPLC)楊

砂單胞菌Arenimonas│oryziterrae 質量規格:分析標準品,≥99.5%(HPLC)對羥基丁酯

: HBUM77348資源名稱: 鏈霉菌 質量規格:用于HPLC衍生化,≥99.0% (HPLC)對羥基酯
抗酸染色液(改良Kinyoun冷染法)*松乳菇 1-(4-基)-3-甲基-5-吡唑啉酮環磷鳥

烏飯樹擬莖點霉 2,5-二溴己二二乙酯NADH還原

豇豆慢生根瘤 4-溴鄰苯二甲酐色C還原

阪崎腸桿 亞磷二甲酯布魯東氏酪激

淡黃曲霉 5-吡啶-2-羧銅鋅超氧化物歧化

黑曲霉 DL-2-甲基丁甲酯L-天冬氧化

裂孔平伏 2-特戊酰氨基-6-皮考啉交替氧化

菊苣假單胞 2-特戊酰基吡啶脫氫

釀酒酵母 1-萘基異酯V型ATP

煙芽孢桿 5-氟-2-異亞基氨基氧苯脫氧核糖核

枯草芽孢桿 溴二二甲酯透明質

釀酒酵母 鈉固氮

華根霉 3,5-二甲基-1-氫-吡咯-2-羧叔丁酯-4-羧乙酯條紋花葉病

黃傘(可訂購) 2-溴二苯并呋喃線條花葉病

畢赤酵母 3,4-二肼鹽鹽1.6二磷果糖

 


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