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當前位置：上海撫生實業有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>> Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒
| 貨號 | FS-X9557 |
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操作步驟：
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落， 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養液重新懸浮細胞，即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
產品屬性：
產品名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 產品貨號 |
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit | 50次 | FS-X9557 |
產品介紹：
本試劑盒是一種采用Annexin V-Alexa Fluor 488與PI雙染法進行細胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。 細胞凋亡早期改變發生在細胞膜表面，這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨(PS)從細胞膜內轉移到細胞膜外，使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂，正常主要存在于細胞膜的內面，在細胞發生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結合到磷脂類如PS的特性，對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉移到細胞膜外不是凋亡所*的，也可發生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細胞非透過性熒光染料碘化丙啶不能通過完整的活細胞，但能夠對壞死和凋亡晚期的細胞進行染色， 因此通常將Annexin V與PI配合染色， 以區別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡的晚期細胞。 操作步驟： 1、細胞樣品的準備： a．對于貼壁細胞：小心收集細胞培養液到一離心管內備用。用消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。 b．對于懸浮細胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5毫升離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。 2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。 3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細胞，調節其濃度為 1×106/ml。 4、取 100μl的細胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-Alexa Fluor 488 和10μl 20μg/ml的PI溶液。 5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。 6、在反應管中加 400μl PBS，流式細胞儀(FACS)分析。 Annexin V-Alexa Fluor 488 PI雙染流式分析圖譜 Jurkat細胞用誘導凋亡后用Annexin V-Alexa Fluor 488/PI雙染流式分析圖譜 儲存條件：2～8℃，避光保存 |
注意事項：
1、本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養基，并用新鮮培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，對于大多數情況孵育 1 小時即可，白細胞需要培養較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。
蘭尼定受體3(RYR3)檢測試劑盒 forRyanodineReceptor3(RYR3)
甘丙肽(GAL)檢測試劑盒 forGalanin(GAL)
含亮氨suan豐富重復蛋白3C(LRRC3C)檢測試劑盒 forLeucineRichRepeatContainingProtein3C(LRRC3C)
胎兒腎鈣黏蛋白(KCAD)檢測試劑盒 forCadherin,FetalKidney(KCAD)
分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)檢測試劑盒 forSecretograninII(SCG2)
過氧化mei8(GPX8)檢測試劑盒 forGlutathionePeroxidase8(GPX8)
能受體β2(ADRβ2)檢測試劑盒 forAdrenergicReceptorBeta2(ADRb2)
CREB調節轉錄輔激活因子3(CRTC3)檢測試劑盒 forCREBRegulatedTranscriptionCoactivator3(CRTC3)
層粘連蛋白γ3(LAMγ3)檢測試劑盒 forLamininGamma3(LAMC3)
羥烷基輔meiA脫氫meiβ(HADHβ)檢測試劑盒 forHydroxyacylCoenzymeADehydrogenaseBeta(HADHb)
多巴anβ羥化mei(DβH)檢測試劑盒 forDopamineBetaHydroxylase(DbH)
GM2神經節脂激活因子(GM2A)檢測試劑盒 forGM2GangliosideActivator(GM2A)
肌腱蛋白X(TNX)檢測試劑盒 forTenascinX(TNX)
封閉蛋白10(CLDN10)檢測試劑盒 forClaudin10(CLDN10)
suan性幾丁質mei(CHIA)檢測試劑盒 forChitinase,Acidic(CHIA)
胸腺表達趨化因子(TECK)檢測試劑盒 forThymusExpressedChemokine(TECK)
基質金屬蛋白mei1(MMP1)檢測試劑盒 forMatrixMetalloproteinase1(MMP1)
Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒勞拉相關物質E標準品 規格:25mg 英文名稱：Lorazepam Related Compound E
lv噻tong標準品 規格:200mg 英文名稱：Chlorthalidone
fu尼縮松標準品 規格:200mg 英文名稱：Flunisolide
布他比妥標準品 規格:200mg 英文名稱：Butalbital CIII
尼扎替定標準品 規格:200mg 英文名稱：Nizatidine
維生suE醋suan酯標準品 規格:250mg 英文名稱：
曲silvan相關物質A標準品 規格:20mg 英文名稱：
溴化jia哌佐酯標準品 規格:200mg 英文名稱：Mepenzolate Bromide
拉西坦相關物質B標準品 規格:20mg 英文名稱：
碘海chun相關物質C標準品 規格:100mg 英文名稱：
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