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| 貨號 | FS-X9560 |
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產品介紹:
在正常細胞中，磷脂酰絲氨suan（PS）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨suan（PS）由脂膜內側翻向外側。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨suan有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨suan與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V 進行熒光素FITC 標記，以標記了的Annexin V 作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI 能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V 與PI 匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。 本試劑盒可應用于培養細胞凋亡檢測（不推薦用于檢測組織樣本）。 |
中文名稱：Annexin V-FITC/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒
英文名稱：Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit
產品規格：10T|20T|50T|100T
貨號：FS-X9560
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
類粘蛋白(ORM)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ORM ELISA Kit，ORM，
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人抗sp100抗體(sp100)elisa檢測試劑盒 英文名稱：sp100 ELISA Kit，sp100，
緊密連接蛋白1(ZO1)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ZO1 ELISA Kit，ZO1，
性成纖維細胞生長因子6(bFGF-6)elisa檢測試劑盒 英文名稱：bFGF-6 ELISA Kit，bFGF-6，
激動異構mei/細胞分裂suMB(CKMB)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CKMB ELISA Kit，CKMB，
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腎上腺髓質su(ADM)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ADM ELISA Kit，ADM，
沙眼衣原體抗體(CT)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CT ELISA Kit，CT，
熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)elisa檢測試劑盒 英文名稱：HSP gp96 ELISA Kit，HSP gp96，
Annexin V-FITC/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒3-jia氧基酪氨suan標準品 規格:50mg 英文名稱：
碘普羅an相關物質B標準品 規格:50mg 英文名稱：
鹽suan標準品 規格:50mg 英文名稱：Cathinone Hydrochloride CI
曲安na德標準品 規格:500mg 英文名稱：Triamcinolone Acetonide
克利溴an標準品 規格:500mg 英文名稱：Clidinium Bromide
馬來suan依那普利標準品 規格:200mg 英文名稱：Enalapril Maleate
β-環糊精標準品 規格:250mg 英文名稱：Beta Cyclodextrin
利塞膦suan相關物質C標準品 規格:20mg 英文名稱：
鹽suanjia肟標準品 規格:350mg 英文名稱：Cefmenoxime Hydrochloride
來fumi特標準品 規格:200mg 英文名稱：Leflunomide
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