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貨號 | FS-X9935 |
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產品介紹:
用途: 顯示細胞中酸性蛋白 注意事項: 酸性大部分被染成綠色。 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
中文名稱:酸性蛋白染色液(細胞專用)
英文名稱:
產品規格:2×50ml
貨號:FS-X9935
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
萊西氏菌屬布氏桿菌菌體蛋白抗體Human GALK2 小鼠CD44分子(CD44)免疫試劑盒
褪色沙)磷化B-Raf抗體Human GALNT4 小鼠CD34分子(CD34)免疫試劑盒
水叢毛單胞菌磷化B-Raf抗體Human GALM 小鼠CD33分子(CD33)免疫試劑盒
土生隱球酵母多聚合激3磷化抗體Human GADD34 小鼠CD30分子(CD30)免疫試劑盒
秀珍菇癌易感基因1抗體Human GABRG2 小鼠CD19分子(CD19)免疫試劑盒
紫棕炭團菌Bcl-2同源拮抗劑抗體Human GADD45A 小鼠CC趨化因子受體6(CCR-6)免疫試劑盒
嗜熱鏈球菌β3腎上腺能受體抗體Human GADD45GIP1 小鼠cAMP反應元件結合蛋白(CREB)免疫試劑盒
土生克雷伯氏菌腦鈉/利鈉肽抗體Human GAGE2D 小鼠Ca-ATP(Ca-ATPase)免疫試劑盒
馬昆德擬青霉BZW2蛋白抗體Human GAGE1 小鼠B因子(BF)免疫試劑盒
布魯氏菌緩激肽B1受體抗體Human GAK 小鼠B淋巴瘤因子2(Bcl-2)免疫試劑盒
釀酒酵母鈣激活通道蛋白α1抗體Human GAGE7 小鼠B淋巴瘤-XL(Bcl-xl)免疫試劑盒
彎曲芽孢桿菌卵黃狀黃斑病蛋白2抗體Human GABARAPL1 小鼠B活化因子(BAFF)免疫試劑盒
解淀粉周培瑾氏菌絲/蘇蛋白激SAD-B抗體Human GABARAPL2 小鼠BH3結構域凋亡誘導蛋白(Bid)免疫試劑盒
可可球二孢鼻咽癌相關轉錄調節蛋白抗體Human GALE 小鼠Bcl-2相關X蛋白(BAX)免疫試劑盒
灰黃淺黃酵母腦肌激BCK抗體Human GAN 小鼠Apelin 免疫試劑盒
釀酒酵母β葡萄糖抗體Human GAPDHS 小鼠Apelin 13(AP13)免疫試劑盒
發光假蜜環菌(亮菌)Armillaria tabescens 質量規格:>98%,BRα-內肽試劑盒3,5,6,7,8,3’,4’-七氧基
納豆芽孢桿菌Bacillus│natto 質量規格:>98%,BRα肌動蛋白試劑盒25-羥基原人參二
宇佐美曲霉Aspergillus│usamii 質量規格:>90%,BSα-黑色激試劑盒3-氫化去氫松苓
酸性蛋白染色液(細胞專用)斑玉蕈 2-氨基-5-溴-4,6-二鋅指蛋白703
文昌野野村氏 2-基-5-吡啶草
粉狀畢氏酵母 4-溴-2-甲苯肺炎衣原體
NCI-H647(人肺癌)(通過STR鑒定) 2-嘧啶-5-羧乙酯梅螺旋體抗體
乳桿屬 雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮苯
短波單胞屬 N-Boc-4-羥基-L-脯甲酯(混旋)苯氫化
硫色曲霉 2--5-甲氧基苯可溶性間粘附分子
解脂假絲酵母解脂變種 2-甲氧基-5-硝基-3-可溶性間粘附分子
雞腿菇 2-硝基-5-溴苯組脫羧
紡織品 4-氨基偶氮苯 2--5-氟三氟甲苯鈣釋放激活鈣通道蛋白
冬青節桿 5--2-氟-三氟甲苯ORAIL鈣釋放激活鈣通道蛋白
葡萄座腔 芐基縮水甘油硫氧還蛋白-2
弗吉尼亞鏈霉 3-溴苯磺酰磷脂D
谷棒桿 3-溴苯脂氧合
鹽漬芽孢桿屬 5-溴-2-嘧啶甲甲酯ERBB受體反饋抑制劑1
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