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貨號	FS-X9640

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：細胞增殖與示蹤檢測試劑盒

英文名稱：CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

產品規格：500T

貨號：FS-X9640

產品介紹:

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 是基于CFDA, SE對細胞進行示蹤及增殖檢測的試劑盒，由CFDA,SE粉末、溶劑及相關細胞染色緩沖液組成，該試劑盒主要工作原理為：CFDA, SE具有細胞膜滲透性，本身不具有熒光發光性。當通過被動運輸穿透細胞膜進入活細胞后，可被胞漿內的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE），后者可發強烈的綠色熒光，不能穿透細胞膜，能完好的保留在胞內。CFSE還可自發性并不可逆地與細胞內的氨基結合從而偶聯到細胞蛋白質上，同時過量且未被偶聯的CFDA, SE通過被動擴散回到細胞外培養基內，被后續清洗步驟所清除。經CFDA, SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩定，穩定標記的時間可達數月，因此非常適用于細胞群落分析。

CFDA, SE標記細胞的熒光非常均一，優于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，CFSE 標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變為親代細胞的一半，通過流式細胞儀（FL1通道）根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次（1/2的熒光強度），二次（1/4的熒光強度），三次（1/8的熒光強度），以及更多分裂次數的細胞。CFSA，SE可檢測分裂次數多達八次甚至更多。經CFDA, SE標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。CFDA, SE常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可用于成纖維細胞，自然殺傷細胞，造血祖細胞等其他細胞的增殖檢測。

CFDA, SE標記細胞呈綠色熒光，Ex=494nm，Em=521nm，除了流式細胞儀檢測細胞增殖外，還可用熒光酶標板定量活細胞數目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。

本品為CFDA，SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒，包含配制CFDA，SE儲存液所需的溶劑和細胞標記用的染色緩沖液，簡化了實驗前期準備工作。另，CFDA,SE標記細胞一般15min即可完成，對于不同細胞，需要自行摸索佳標記時間。按照每個樣本的標記體積為2ml計算。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

β細胞su(βTC)檢測試劑盒 forBetacellulin(bTC)

R-脊椎蛋白3(RSPO3)檢測試劑盒 forR-Spondin3(RSPO3)

羰基還原mei1(CBR1)檢測試劑盒 forCarbonylReductase1(CBR1)

維生suD結合蛋白(DBP)檢測試劑盒 forVitaminDBindingProtein(DBP)

谷丙轉氨mei(ALT)檢測試劑盒 forAlanineAminotransferase(ALT)

早期B-細胞因子1(EBF1)檢測試劑盒 forEarlyB-CellFactor1(EBF1)

骨成型蛋白3(BMP3)檢測試劑盒 forBoneMorphogeneticProtein3(BMP3)

細胞周期suM4(CCNM4)檢測試劑盒 forCyclinM4(CNNM4)

冠蛋白1C(CORO1C)檢測試劑盒 forCoronin1C(CORO1C)

發動蛋白2(DNM2)檢測試劑盒 forDynamin2(DNM2)

7-脫氫還原mei(DHCR7)檢測試劑盒 for7-DehydrocholesterolReductase(DHCR7)

Bcl2關聯X蛋白(Bax)檢測試劑盒 forBcl2AssociatedXProtein(Bax)

轉錄激活因子7(ATF7)檢測試劑盒 forActivatingTranscriptionFactor7(ATF7)

防御suα5(DEFα5)檢測試劑盒 forDefensinAlpha5,PanethCellSpecific(DEFa5)

多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉移mei7(GALNT7)檢測試劑盒 forPolypeptide-N-Acetylgalactosaminyltransferase7(GALNT7)

胞裂蛋白6(SEPT6)檢測試劑盒 forSeptin6(SEPT6)

皮質su1(CTXN1)檢測試劑盒 forCortexin1(CTXN1)
細胞增殖與示蹤檢測試劑盒lv胍相關物質D標準品規格:25mg 英文名稱：Proguanil Related Compound D

西平相關物質A標準品規格:50mg 英文名稱：

醋suanfu輕松標準品規格:100mg 英文名稱：Fluocinonide

西丁標準品規格:500mg 英文名稱：Cefoxitin

雙羥萘suan撲蟯寧標準品規格:500mg 英文名稱：Pyrvinium Pamoate

紅霉su標準品規格:200mg 英文名稱：Erythromycin Estolate

諾孕酯標準品規格:200mg 英文名稱：Norgestimate

馬來suan卡比沙明標準品規格:200mg 英文名稱：Carbinoxamine Maleate

甘露糖標準品規格:300mg 英文名稱：Mannose

鹽suan哌丁an標準品規格:200mg 英文名稱：Loperamide Hydrochloride
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)