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貨號	FS-X9740

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：Caspase-1活性測定試劑盒

英文名稱：Caspase 1 Activity colorimetric assay Kit

產品規格：20T|50T|100T

貨號：FS-X9740

產品介紹:

本試劑盒適用于測定哺乳動物組織、細胞caspase-1活性。測定原理基于Caspase-1特異水解其多肽底物N-acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA(Ac-YVAD-pNA)，釋放出游離的硝基pNA，后者呈黃色在405nm具有大吸收峰，用可見光分光光度比色方法測定。其吸光度值對應于Caspase-1的水解活性。

細胞凋亡屬于程序化細胞死亡，可見于各種器官和細胞，在正常發育、生理、病理過程中對細胞和器官的穩態具有十分重要的調節作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含10多個成員。其中Caspase-1是可剪切IL-1b和IL-18前體產生活性細胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前體蛋白產生20kD和10kD片斷，這兩個片斷可以形成異源二聚體，并進一步形成四聚體。此四聚體具有蛋白酶活性。Caspase-1通過剪切Bcl-XL調節細胞凋亡，并通過對細胞因子前體的剪切來調控相關細胞因子介導的免疫炎性反應。

運輸及保存：試劑常溫運輸。到達后按要求儲存，1年內穩定。

所需儀器：酶標儀與96孔酶標板；或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。

工作波長：大吸收波長405nm，如不具備也可在400～450nm范圍內測定，但靈敏度略降。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

25羥基維生D3(25(OH)D3/25 HVD3)英文名：25(OH)D3/25 HVD3 Bcl2樣凋亡蛋白14抗體包裝5g

25羥基維生D3(25 HVD3)英文名：25 HVD3 Bcl2蛋白修飾因子抗體包裝1g

25羥基膽固(25-OHC)英文名：25-OHC 骨形態發生蛋白11抗體包裝5g

20S蛋白體(20SP)英文名：20SP BCL2樣15促凋亡蛋白抗體包裝25g

17-類固(17-KS)英文名：17-KS 骨堿性磷抗體包裝100g

17羥孕(17-OHP)英文名：17-OHP 磷化T淋巴連接蛋白抗體包裝25g

17羥皮質類固(17-OHCS)英文名：17-OHCS 磷化T淋巴連接蛋白抗體包裝500g

17-α睪(17-αMT)英文名：17-αMT 腦納前體抗體包裝10MG

16α羥基雌1(16-α OHE-1)英文名：16-α OHE-1 腦納前體抗體包裝100mL

15脂加氧(15-LO/LOX)英文名：15-LO/LOX 骨髓基質干抗原1抗體包裝25mL

12羥二十烷四烯(12-HETE)英文名：12-HETE 磷化蛋白酪激ATK抗體包裝1g

1,4,5-三磷肌(IP3)英文名：IP3 磷化蛋白酪激ATK抗體包裝5g

1,3-βD葡葡糖苷(1,3-βD-Glu)英文名：1,3-βD-Glu 磷化相關死亡促進因子抗體包裝100ml

1,25二羥基維生D3(1,25 DHVD3)英文名：1,25 DHVD3 磷化死亡調解子抗體包裝1g

組織蛋白B(CTSB)英文名：CTSB 磷化死亡調解子抗體包裝250mg

甘油酯激線粒體抗體基質金屬蛋白3(MMP3)PTZ-343 is a phenothiazine derivative with chemical name: sodium 3-(10H-phenothi
Caspase-1活性測定試劑盒果形正青霉檸檬酸甜菜堿麻疹病IgG抗體

假結核耶爾森氏 4-頻哪酯毛球族同族體1

土地桿 3,5-二氟-4-溴苯毛球族同族體2

哈茨木霉 4-甲氧基苯基酸頻那酯毛球族同族體3

曲霉 4-基-3-氟門

美澳型核果褐腐病 1,8-二溴萘門冬酰

腐皮殼 3,4,5-三溴吡唑錳超氧化物歧化

綠色鏈霉 2-氟-5-吡啶球蛋白A

微小桿 5-靛紅球蛋白A1

靈芝 4-溴-2-甲氧基芐球蛋白D

水溶性非食用色快速篩查盒 3,5-雙(叔丁基)苯甲球蛋白E

蟬擬青霉 2-氟-4-酸球蛋白E Fc段受體Ⅰ

高地芽孢桿 2-基-4-硝基-6-溴苯球蛋白G

平菇 (S)-(-)-b-乙球蛋白G1

蠟樣芽孢桿反式-肉桂酰球蛋白G2
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)